2011 Fiscal Year Research-status Report
癌細胞傷害活性と免疫賦活効果を示すNKT細胞を応用した新規・卵巣癌免疫療法の開発
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23791850
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Research Institution | Saitama Medical University |
Principal Investigator |
鈴木 元晴 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (50406443)
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Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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Keywords | 免疫 / がん / 樹状細胞 / NKT細胞 |
Research Abstract |
健常人末梢血単核球をα-galactosylceramide (α-GalCer) にて刺激してα-GalCer特異的ヒトインバリアントNKT (iNKT) 細胞の増殖を誘導した。さらに高速自動セルソーターを使用して、Vα24+Vβ11+6B11+ヒトiNKT細胞を精製分離し、7-9日おきに複数回刺激することで株化した。免疫抑制性ミエロイド細胞とiNKT細胞の相互作用を解析することを目的に、末梢血CD15+CD11b+ミエロイド細胞を磁気分離して、血清アミロイドA (SAA) を負荷した際のIL-10産生を評価した。その結果、SAAによって誘導されるIL-10は極めて微量であり、また、磁気分離によって得られるミエロイド細胞数が極めて少ないことから、iNKT細胞との共培養による評価が困難であることが明らかとなった。そこで、免疫制御の中心的役割を果たす樹状細胞 (DC) 機能に着目して解析を行った。末梢血単核球よりCD14陽性細胞を磁気分離して、ヒトリコンビナントIL-4およびGM-CSFを添加することで、モノサイト由来DCを誘導した。iNKT細胞とDCとの共培養系において、DCにα-GalCerを負荷した際にIL-12p70の産生上昇が認められ、その一方でオステオポンチン (osteopntin: OPN) の産生が著しく抑制されることを見出した。OPNは、がん細胞とがん微小環境に存在する多様な細胞群から産生され、がんの転移を促進する。また、がん組織あるいは血液循環におけるOPNレベルの上昇により、生命予後を悪化させることが知られている。したがって、iNKT細胞は、DCとの相互作用により、IL-12p70依存性の細胞性免疫応答を促進するとともに、OPNレベルを低下させることによって、がんの転移を抑制する機能を有することが示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
がんに対する細胞性免疫応答を効果的に発揮させる為には、がん微小環境における免疫抑制機構を解除することが重要であると考えられている。申請者は、免疫抑制性ミエロイド細胞が産生するIL-10を、iNKT細胞活性により抑制することができれば難治性の卵巣癌を制御できるという仮説を立ててきた。これを検証する為に、SAAを用いて免疫抑制性ミエロイド細胞の誘導を試みたが、ターゲット細胞の収量が極めて少ないこと、さらにIL-10産生が微量であることから評価が困難であることが判明した。そこでターゲット細胞を変更する必要があり、研究の進行に大きな遅れが生じた。
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Strategy for Future Research Activity |
申請者は、解析に用いる細胞種を変更することにより、免疫抑制性がん微小環境を制御しうる新たなiNKT細胞活性を見出すことができた。しかし、このメカニズムは現在のところ明らかとなっていない。また、ヒトiNKT細胞には機能的に異なる2つの代表的なサブセットが存在する為、サブセット毎に機能解析する必要がある。そこで、早期に高速自動セルソーターを駆使して、これらを精製分離して、DCとの共培養系による解析を行い、効率良くメカニズムを明らかにする。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
高速自動セルソーターを使用してCD4+CD8β-, CD4-CD8β-の各iNKT細胞サブセットを精製分離する。それぞれのiNKT細胞サブセットのサイトカイン産生をフローサイトメトリーベースのサイトカインアレイで網羅的に解析する。iNKT細胞サブセットが産生するサイトカインの中和抗体をDCとの共培養系に添加して、OPN産生低下をもたらす責任分子を同定する。この為に、サイトカイン中和抗体、ELISA、リアルタイムPCR試薬等を購入して解析に使用する。
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Research Products
(14 results)