分子生物学的手法を用いた胆道閉鎖症術後の肝内胆管再生機構の解明

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23792025
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 田中 拡 東北大学, 大学病院, 助教 (50579448)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2016-03-31
• Keywords: 胆管上皮細胞分化

Outline of Annual Research Achievements

胆道閉鎖症は肝外胆管の閉塞が主なる原因である。一方、葛西手術時の病理組織学検査所見より肝内の胆管も同時に障害を受け、減少し、再生していると我々は考えている。葛西手術術後に胆汁排泄を得られるのは、肝内胆管が再生し、その胆管同士のネットワークができると肝内からの胆汁排泄を得られると我々は考えている。よって、本研究の目的は、胆管上皮細胞が障害を受けたの肝芽細胞から胆管上皮細胞へ分化・増殖制御に着目し、そのメカニズムを明らかにすることで、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明することである。
転写因子C/EBPαは胆管上皮細胞の分化への関連を指摘されているが、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムは不明である。そこで、C/E
BPαの下流にある因子を特定し、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明すれば、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明できると考えている。
いままで、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索するため肝芽細胞の分離精製を行った。マウス胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製する予定であった。FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することに難渋した。肝芽細胞を用いた次のステップとして、ノックダウン実験を行う予定であったが、実験系がいまだ確立できていない。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

本研究は、転写因子C/EBPαに着目し、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明することである。そこで、ファーストステップとしてC/EBPαの下流にある因子を特定することである。そのためには、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索するため肝芽細胞の分離精製の必要をようする。しかし、マウス胎児肝を用いて、FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することに難渋している。肝芽細胞を用いた次のステップとして、ノックダウン実験を行う予定であったが、実験系がいまだ確立できていない。そのため、この研究は予定よりも大幅に遅れている。

Strategy for Future Research Activity

昨年度まで、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索するため肝芽細胞の分離精製を行った。マウス胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製する予定であった。FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することに難渋した。これらは、肝内胆管の再生メカニズムを解明するうえでは絶対的に必要であり、かつ重要な過程であることから、今年度も細胞数を増やせるよう継続し実験を継続していく。また、同時進行で、細胞株を用いた方法でも行っていく。
また、次のステップとして肝芽細胞もしくは細胞株を用いて、ノックダウン実験を行う。

Causes of Carryover

マウス胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製する予定であったが、FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することができなかったため、計画を変更しノックダウン実験を次年度に行うことにしたため、未使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

このため、肝芽細胞の分離する系の確立およびノックダウン実験を次年度に行うこととし、未使用額はその経費に充てることにしたい。