2012 Fiscal Year Research-status Report
高齢者のヒト歯髄細胞からｉＰＳ細胞を効率よく樹立するための基礎的検討
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23792328
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
飯田 一規 岐阜大学, 医学部附属病院, 助教 (30585237)
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| Keywords | 再生医療 / 歯髄細胞 / iPS細胞 / 低酸素 |
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| Research Abstract |
我々は、これまで若年者のヒト智歯から歯髄細胞（Dental Pulp Cell : DPC）を樹立し、DPCが高い増殖・分化能（ステムネス性：幹細胞性）を有し、人工多能性幹細胞（iPS細胞）へ高率に誘導できることを明らかにした。また、高齢者からのDPCは、若年者に比べてはるかに樹立効率が低くステムネス性の維持も困難であったが、低酸素下での培養によりこれらの問題を解決するに至っている。しかし、高齢者から得られたDPCのiPS細胞への誘導効率は極めて低く、再生医療に応用するためには、今後、原因の解明と改善が必要な状況となっている。本研究では、若年者のヒト線維芽細胞からiPS細胞への誘導に特定期間の低酸素培養が有効であったとの報告に注目し、高齢者から得られたDPCで、どの程度の効果が得られるのかを検証するとと伴に iPS細胞化に最適な誘導条件について検討を行い、誘導効率の向上を目指した。
昨年度では、DPCからiPS細胞への誘導効率を上昇させる酸素培養条件について検討を行い、従来よりも約4～7倍のコロニー数を得られる条件を見出した。これは、若年者だけではなく、高齢者にも同様の効果をもたらした。この条件によって得られたiPS細胞は、免疫染色、realtime PCR法、テラトーマ形成、EB形成を行い、従来のiPS細胞と同等の未分化性、多分化能をもつことがわかった。
今年度では通常酸素条件と低酸素条件での、iPS誘導における遺伝子変化を探索し、上皮系細胞遺伝子やサイトカイン関連遺伝子の発現量に違いが生じていることが分かった。key遺伝子の同定にまでは至らなかったため、次年度ではメカニズムの更なる探索を行う。これらの研究はiPS誘導、低酸素研究に新たな提言を与えられる可能性がある。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
歯髄細胞からiPS細胞への誘導に有効な酸素条件を見出すことができ、かつ、それに特徴的な遺伝子変化を見出すことができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
iPS細胞へ樹立効率を向上させたメカニズムについて更なる解析を行う。また、酸素条件、年齢条件により樹立されたiPS細胞の性質の違いについて解析を行う。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
3月に論文校正および論文投稿を予定していたため、研究費を残していたが、請求が3月末および4月以降となったため、次年度使用額が生じた。
次年度研究費は、上記に加え、酸素条件の違いによる、遺伝子・代謝等の変化について、realtime PCR法、Western blotting法などにより解析を行う。また、研究成果をまとめ、論文投稿を行う。
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