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2011 Fiscal Year Annual Research Report

ヤギ視床下部由来神経細胞株を用いた家畜の繁殖機能制御メカニズムの解明

Research Project

Project/Area Number 23880012
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

松田 二子  名古屋大学, 生命農学研究科, 助教 (10608855)

Keywords畜産学 / 応用動物 / 神経科学 / 細胞・組織
Research Abstract

哺乳動物の繁殖周期は視床下部からの指令によって制御されており、神経ペプチド・キスペプチンが最も上位の調節因子と考えられている。キスペプチンおよびその関連ペプチドは家畜の繁殖障害の予防や治療への応用が期待されるが、そのために必要な細胞レベルでの解析は十分に行われていない。本研究では、ウシの良好なモデル動物であるシバヤギを用い、キスペプチンニューロンおよびGnRHニューロンに由来する神経細胞株を作製し、この細胞株を用いてキスペプチン発現制御機構の解明および家畜繁殖制御の新規治療法開発を目指す。
平成23年度は、ヤギ視床下部細胞の分離と不死化を実施した。3週齢シバヤギより脳を取り出し、視床下部の視索前野と弓状核からそれぞれ細胞を分離、培養した。癌原遺伝子であるシミアンウイルス40(SV40)large T抗原遺伝子をレンチウイルスベクターを用いて導入し、これらの細胞を不死化した。不死化後、良好に増殖するようになった細胞群を得られたため、これらのクローニングを行った。細胞が一個ずつになるよう分離し、それぞれを細胞クローンとした。視索前野と弓状核から計60個の細胞クローンを得ることに成功した。神経細胞由来の細胞クローンを選別するため、各細胞クローンよりmRNAを抽出し、神経細胞マーカー遺伝子・NSEの発現解析を開始した。
同時に、キスペプチン遺伝子上流域のクローニングを実施した。ヤギのキスペプチン遺伝子5'上流域配列についてはこれまで報告がなく、またヤギの全ゲノム配列は未だ明らかでないため、ゲノムウォーキング法により上流域配列取得を試みた。その結果、キスペプチン遺伝子の翻訳開始点から約3kbの上流域配列を得ることができた。この遺伝子上流域は、キスペプチンの転写制御機構解析に使用していく。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成23年度の研究実施目標の柱であった、ヤギ視床下部由来の不死化細胞を得ることに成功した。希望するキスペプチンあるいはGnRHニューロン細胞株の特定までは至っていないものの、多くのクローン細胞株を取得し、発現遺伝子マーカーの解析まで到達することができた。さらに、ヤギキスペプチン遺伝子上流域の取得にも成功し、細胞レベルでキスペプチン転写制御機構を解析するための基盤を得ることができた。

Strategy for Future Research Activity

神経細胞マーカーのmRNA発現を解析し、得られたヤギ視床下部不死化細胞の各クローンの由来を調べる。神経細胞由来であることが特定された細胞株について、キスペプチン、GnRH、ニューロキニンB、ダイノルフィン、エストロゲン受容体等のmRNA発現およびタンパク質発現を測定し、視索前野キスペプチンニューロン、弓状核キスペプチンニューロン、GnRHニューロンの各細胞株を特定する。得られた細胞株を用い、キスペプチンの転写制御機構の解明、キスペプチンの産生を調節する因子の探索、キスペプチンagonist/antagonistおよびキスペプチン産生促進/抑制因子の評価等を実施し、キスペプチンニューロンとGnRHニューロンの働きを細胞レベルで解明していく。

  • Research Products

    (10 results)

All 2012 2011

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (4 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Effect of RNA interference of BID and BAX mRNAs on apoptosis in granulosa cell-derived KGN cells2012

    • Author(s)
      Sai T, Matsuda F, Goto Y, Maeda A, Sugimoto M, Gao H, Kabir AKMA, Li JY, Manabe N
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 58巻 Pages: 112-116

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 抗アポトーシス因子・cellular FLICE-inhibitory protein (cFLIP)による哺乳類の卵胞選抜制御機構2012

    • Author(s)
      松田二子、眞鍋昇
    • Journal Title

      比較内分泌学

      Volume: 38 Pages: 27-32

    • DOI

      10.5983/nl2008jsce.38.27

  • [Journal Article] Follicular growth and atresia in mammalian ovaries : regulation by survival and death of granulosa cells2012

    • Author(s)
      Matsuda F, Inoue N, Manabe N, Ohkura S
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 58 Pages: 44-50

    • DOI

      10.1262/jrd.2011-012

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Bid and Bax are involved in granulosa cell apoptosis during follicular atresia in porcine ovaries2011

    • Author(s)
      Sai T, Goto Y, Yoshioka R, Maeda A, Matsuda F, Sugimoto M, Wongpanit K, Jin HZ, Li JY, Manabe N
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 57巻 Pages: 421-427

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Role of cell-death ligand-receptor system of granulosa cells in selective follicular atresia in porcine ovary2011

    • Author(s)
      Inoue N, Matsuda F, Goto Y, Manabe N
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 57 Pages: 169-175

    • DOI

      10.1262/jrd.10-198E

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ブタ顆粒層細胞のBidとBax発現を阻害するとアポトーシス率が低下する2012

    • Author(s)
      眞鍋昇、才貴史、松田二子、小野山一郎、東福望、後藤康文、A.K.M.A.KABIR、高紅梅、李俊佑
    • Organizer
      第153回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      大宮ソニックシティ(埼玉県)
    • Year and Date
      2012-03-27
  • [Presentation] Role of Apoptosis Initiator FOXO3 in Granulosa Cells During Follicular Atresia in Pig Ovaries2011

    • Author(s)
      Matsuda F, Inoue N, Ohkura S, Manabe N
    • Organizer
      2nd World Congress on Reproductive Biology
    • Place of Presentation
      ケアンズコンベンションセンター(オーストラリア)
    • Year and Date
      2011-10-10
  • [Presentation] Kisspeptin stimulates luteinizing hormone secretion and follicular development in Japanese Black beef cows2011

    • Author(s)
      Naniwa Y, Nakatsukasa K, Setsuda S, Oishi S, Fujii N, Wakabayashi Y, Okamura H, Matsuda F, Uenoyama Y, Tsukamura H, Maeda K-I, Ohkura S
    • Organizer
      2nd World Congress on Reproductive Biology
    • Place of Presentation
      ケアンズコンベンションセンター(オーストラリア)
    • Year and Date
      2011-10-10
  • [Presentation] 黒毛和種成熟雌ウシにおいてキスペプチン末梢投与は黄体形成ホルモン分泌および卵胞発育を刺激する2011

    • Author(s)
      難波陽介、中務桂佑、説田章平、大石真也、藤井信孝、若林嘉浩、岡村裕昭、松田二子、上野山賀久、束村博子、前多敬一郎、大蔵聡
    • Organizer
      第104回日本繁殖生物学会大会
    • Place of Presentation
      いわて県民情報交流センター・アイーナ(岩手県)
    • Year and Date
      2011-09-15
  • [Book] 卵子学、執筆項目:顆粒膜(層)細胞アポトーシスの分子機構2011

    • Author(s)
      眞鍋昇、松田二子
    • Total Pages
      1210(執筆箇所:424-432)
    • Publisher
      京都大学出版会

URL: 

Published: 2013-06-26  

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