2023 Fiscal Year Research-status Report
Therapeutic screening and molecular basis for Congenital Nephrotic Syndrome of the Finish type (CNF)
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23K06165
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
スイコ メリー・アン・ソテン 熊本大学, 大学院生命科学研究部附属グローバル天然物科学研究センター, 助教 (20363525)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | ネフローゼ症候群 / 腎糸球体 / Nephrin / 化合物スクリーニング / HiBiT-Nephrin |
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| Outline of Annual Research Achievements |
フィンランド型先天性ネフローゼ症候群 (CNF) は，腎糸球体の最終濾過膜 (スリット膜) を形成するタンパク質Nephrinの遺伝子 (NPHS1) 変異で引き起こされ，生後3ヵ月以内に高度タンパク尿を呈する希少難治性腎疾患である．Nephrin変異体の細胞膜上発現の低下により病態が発症することから，本研究では，HTSに耐えうるNephrinの膜上発現評価系の構築および化合物スクリーニングを企図した．まず，Nephrinの細胞外ドメインにHiBiTを付加したHiBiT-NephrinをHEK293T細胞に過剰発現させ，その膜上発現を特異的に発光で検出する評価系を確立した．このとき，臨床報告のある15種類の変異体のHiBiT-Nephrinの発光値は，既報のNephrin膜上発現の結果と正に相関した．次に，iPS細胞株を独自に樹立済みのE725D変異体に着目し，HiBiT-Nephrin安定発現細胞株を作製し，Selleck社の天然物化合物ライブラリー (計2601化合物) でのスクリーニングを行った．その結果，溶媒処置群 (対照群) の120 %以上の発光値を示す41個の化合物を同定した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初予定通り，CNFの新規治療薬の開発を究極の目的に，HiBiT-Nephirin評価系を用いた化合物スクリーニングを実施し，Nephrinの膜上発現を促進する化合物の探索を行った．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後，同様の化合物処置を行い，Western Blottingを行い，化合物処置により変動するHiBiTの発光値とp-NephrinおよびUpper band-Nephrin（N型糖鎖修飾（成熟度の指標））の発現量に相関があるか否かを検証する．さらに、Hit 化合物から2種類ずつを組み合わせ， HiBiT-E725D Nephrin安定発現細胞株に処置し，発光値を相加的に上昇させる化合物の組み合わせを探索する．将来的には，変異型 Nephrin 安定発現細胞株を用いたsiRNAスクリーニング（特に、小胞体品質管理機構に関わる分子のsiRNA）を行う．最終的に，CNFの新規治療薬開発における重要な基礎的知見を提供するとともに，Nephrinの膜上発現促進機構の解明に向けた研究を実施していく．
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