ALK関連子宮内膜癌の同定、その生物学的特性の解明、そして新規治療戦略への展開

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K06471
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 三枝 信 北里大学, 医学部, 教授 (00265711)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2027-03-31
• Keywords: 子宮内膜癌 / ALK / 免疫染色

Outline of Annual Research Achievements

子宮内膜癌におけるALK発現：子宮内膜癌検体168症例（Grade1（G1）：91例、Grade2（G2）：40例、Grade（G3）：37例）においてALKの免疫染色を行った。Grade1では膜に発現し、一方でGrade3では膜並びに細胞質で強い発現を示していた。また、一部の症例では核発現を示すものも認められた。各GradeにおけるALKの発現は、Grade1及びGrade2と比較してGrade3において有意に高発現であった。 ALK陽性症例のうちGrade3の細胞質で最も多く発現していることを確認した。ALK陽性症例の内、高発現症例と低発現症例をランダムに選択し、in situ hybridization（ISH)を行なった結果、ALKタンパク発現並びにALK mRNA発現では同一部位の局在を示した。また、ISH scoreのうち「-」及び「+1」（-/+1）、「+2」及び「+3」（+2/+3）の2群に分け比較をした結果、ALK mRNA発現とタンパク発現は有意に正の相関を示した。また、子宮内膜癌ALK高発現4症例においてFluorescence in situ hybridization (FISH)を行った。ALK遺伝子上に赤色、緑色の標識をし、正常なら黄色、切断・融合が起きていれば２色を示す。4つの症例において、シグナルが黄色を示していたため、遺伝子転座は認められなかった。以上から、子宮内膜癌、特にG3型では、ALK遺伝子異常を伴わない全長型ALKが発現していると考えた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の予定通り、順調に進んでいる。

Strategy for Future Research Activity

子宮内膜癌でのALK発現調節機構の解明：１）ALK発現調節上流因子の同定・決定
＜目的＞子宮内膜細胞でALK遺伝子発現を制御している転写因子の同定。＜方法＞①ALK遺伝子のプロモーター領域をpGL-4B-luc vectorにクローニングする（作製済）。②このプロモーター領域内に結合する候補転写因子を選出する。これらの候補分子のcDNAをpGL4B-ALK-lucと一緒に子宮内膜癌細胞へcotransfectionし、ルシフェラーゼ法でその活性の変化を検証する。③同定した転写因子のALK遺伝子プロモーター内の結合部位を決定する。④同定した候補転写因子の発現を、卵巣癌の臨床検体で確認する。２）ALK下流因子の同定：増殖・アポトーシス制御系　＜目的＞子宮内膜癌でのALKの機能解析を、細胞増殖とアポトーシス制御の観点から検証する。＜方法＞①細胞増殖：恒常的ALK過剰発現子宮内膜癌細胞を作製し、その細胞増殖能の変化を検証する。また、細胞周期および細胞周期関連分子の発現変化を検証する。②アポトーシス：恒常的ALK発現卵巣癌細胞を、シスプラチンなどの抗癌剤で処理して、アポトーシス誘導をFACS、TUNEL染色などで検証する。同時にアポトーシス関連分子の発現変化も検証する。

Causes of Carryover

実験が順調に進んだため、余計な出費を抑えることができたため。

Research Products

• [Journal Article] Anaplastic lymphoma kinase overexpression enhances aggressive phenotypic characteristics of endometrial carcinoma (2023)
  • Author(s): Yokoi A, Nakamura Y, Hashimura M, Oguri Y, Matsumoto T, Nakagawa M, Ishibashi Y, Ito T, Ohhigata K, Harada Y, Fukagawa N, Saegusa M.
  • Journal Title: BMC Cancer Volume: 23 Pages: 765
  • DOI: 10.1186/s12885-023-11144-2.
  • Peer Reviewed / Open Access