2023 Fiscal Year Research-status Report
Intercellular communication and host function modification via extracellular vesicles in Entamoeba histolytica
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23K06514
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
サントス ハルベルト・ヒメネス 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 助教 (90793779)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | Entamoeba histolytica / extracellular vesicles / colon on chip |
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| Outline of Annual Research Achievements |
親株と肝臓で継代されたエンタメーバ ヒストリティカ HM1:IMSS 株のエキソソームのプロテオミクス解析により、病因関連タンパク質やシステインプロテアーゼ（CP）とその受容体CPBF1およびCPBF8が同定されました。コロンオンチップ上での実験では、CPBF1過剰発現のエキソソームが結腸上皮の電気抵抗に影響を与えないことが示されましたが、炎症誘発性サイトカインの分泌がわずかに増加していることも確認されました。また、テトラスパニン（TSPAN）の中で特にTSPAN12とTSPAN13がプロテアーゼ分泌や細胞接着に関与していることが示されました。TSPAN12とTSPAN13は、CPBF1とともにシステインプロテアーゼの分泌経路を形成することが明らかになりました。要約すると、この研究はエンタメーバのエキソソームのプロテオミクス解析を通じて、病因関連タンパク質やシステインプロテアーゼ、そしてその関連する受容体や分泌経路に関する新たな知見を提供しています。特に、TSPAN12とTSPAN13が寄生原虫の病原性に関与する生物学的機能に重要であることが示されました。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コロンオンチッププラットフォームの最適化が進行中です。 コラーゲンでコーティングされたプレート上の分化した腸細胞を使用して、アメーバ感染に対する宿主細胞の応答を転写物およびタンパク質レベルでモニタリングしました。 E. histolytica 親株および遺伝子サイレンシング株と共インキュベートした後、相対的な転写レベルの ELISA および RT-PCR を実行しました。 有意差は見つからなかったが、これはおそらく患者由来の幹細胞におけるさまざまなサイトカインの高いベースライン発現によるものと思われる。 次に、他の患者の幹細胞における免疫応答を調査する予定です。 TEER 測定値も変動していました。 将来的には、上皮損傷を評価するための TEER および色素透過性アッセイなどの代替方法が最適化される予定です。
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| Strategy for Future Research Activity |
コラーゲンでコーティングされたプレート上の分化した腸細胞を使用して、アメーバ感染に対する宿主細胞の応答を転写物およびタンパク質レベルでモニタリングしました。 E. histolytica 親株および遺伝子サイレンシング株と共インキュベートした後、相対的な転写レベルの ELISA および RT-PCR を実行しました。 有意差は見つからなかったが、これはおそらく患者由来の幹細胞におけるさまざまなサイトカインの高いベースライン発現によるものと思われる。 次に、他の患者の幹細胞における免疫応答を調査する予定です。 TEER 測定値も変動していました。 将来的には、上皮損傷を評価するための TEER および色素透過性アッセイなどの代替方法が最適化される予定です。
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| Causes of Carryover |
リクエストされた金額は研究を継続するために使用されます。 資金は試薬の購入、プロテオミクスおよび RNA-seq 解析の支払い、学会への参加、出版料に利用されます。
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