CCL1-CCR8経路を介した腫瘍内Treg制御による治療法の探索

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K06649
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 中井 慈人 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (40912027)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西塔 拓郎 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (20646468) ; 和田 尚 大阪大学, 大学院医学系研究科, 特任教授(常勤) (70243459)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: CCL1発現細胞 / CCR8発現細胞 / ISH法

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、悪性腫瘍におけるCCL1発現を解析し、CCL1によるCCR8陽性Tregの腫瘍誘導メカニズムを明らかにすることである。令和5年度の研究計画としては、切除悪性腫瘍サンプルを用いたCCL1・CCR8発現細胞を評価することであり、種々のヒト悪性腫瘍（食道癌・胃癌・大腸癌・卵巣癌・膀胱癌・腎癌）におけるCCR8とCCL1発現細胞の位置・数の関係を評価し、CCR8・CCL1が豊富に発現する癌腫を明らかにする計画であった。方法として、まずは、各悪性腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、In situ hybridization（ISH法）を実施した。大腸癌14例、食道癌6例、胃癌7例、卵巣癌6例を対象とし、カウント方法は、CCL1は腫瘍部（全視野）でCCL1陽性細胞数をカウントし、HE染色にて腫瘍面積を測定し、腫瘍単位面積あたりのCCL1陽性細胞数を評価した。また、CCR8は200倍率の視野で、hot spot 5視野を選択し、CCR8陽性細胞数をカウントし、CCR8陽性細胞数を評価した。すると、CCL1発現細胞数とCCR8発現細胞数は正の相関を認めた（相関係数；0.6768）。また、同時に各悪性腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、免疫染色法（IHC法）を用いて腫瘍組織内でのCCR8・CCL1の単位面積当たりの発現細胞数を評価する計画をしている。現状、CCL1について条件設定が終了し、PreliminaryなIHC法の結果では、大腸癌の間質において、免疫細胞の細胞質で、CCL1が染色された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

計画通りに進行している。

Strategy for Future Research Activity

今年度、大腸癌、食道癌、胃癌、卵巣癌の腫瘍切除サンプルのパラフィン包埋標本(FFPE)より薄切スライドを作成し、In situ hybridization（ISH法）を実施したことで、CCL1発現細胞数とCCR8発現細胞数は正の相関を認めた（相関係数；0.6768）。しかしながら、CCL1を発現する細胞を同定することができなかったために、Flowcytometry（FACS）解析においてmRNA発現が検出できるPrime Flow法を用いて、解析していく。

Causes of Carryover

研究進捗に加えて、追加での実験が必要であったため。