2024 Fiscal Year Research-status Report
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23K06653
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
三好 圭 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (70755272)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐田 政史 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (10783508)
森山 大樹 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (70586859)
永吉 絹子 九州大学, 大学病院, 助教 (90761015)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | 膵癌 / 樹状細胞(DC) / CRISPR-Cas9 / Genom wide screening / 免疫療法 / 癌微小環境 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
膵癌の特徴に抑制性の免疫微小環境があり、その１つとして、膵癌では腫瘍内に浸潤する樹状細胞が少なく、機能も抑制されていることがあげられる。そのため、本研究では、腫瘍内への樹状細胞(DC)の遊走と抗原提示能を活性化することが、膵癌の治療効果改善になると考え、DCを活性化するためのCRISPRスクリーニングを考案した。
【１.in vitroの共培養アッセイを用いたスクリーニング】以前より当研究室ではDCとKPCマウス由来膵癌細胞の共培養実験でDCが活性化し、MHC classI/IIや共刺激因子の発現が亢進することを確認している。Cas9を導入したDCにCRISPRsgRNAのノックアウトライブラリーを挿入し、KPCマウス由来膵癌細胞と共培養する。活性が亢進したDCをソーティングすることで、コントロールと比較しDCの活性化を誘導する遺伝子Xを同定した。CRISPR技術で遺伝子X低発現DC、高発現DCを作成した。RNAシークエンス解析に提出し、遺伝子Xの発現に関わる因子を同定する。そのノックアウトもしくは抗体などで処理したDCを作成する。
【２.in vivoでのスクリーニング】皮下移植モデルにGFPを導入したDCを腫瘍内に局注すると、一部活性化したGFP陽性DCが脾臓及びリンパ節に遊走することを確認した。上記遺伝子Xの低発現DC、高発現DCを腫瘍内に移植することで腫瘍の発育の比較、脾臓及びリンパ内に存在するDCの機能を評価する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CRISPR技術を用いて、標的遺伝子X高発現DC、低発現DCを作成することができた。これらのDCを現在RNAシークエンスに提出中であり、遺伝子Xの発現に関わる因子を同定できる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は標的遺伝子Xの発現に関わる因子を同定し、そのノックアウトもしくは抗体などで処理したDCを作成する。そのDCをin vivoで癌細胞と共培養した際に、DCの共刺激因子やMHC classI/IIがコントロールと比較して変化するかを検証する。またこれらのDCをT細胞と共培養した際に、T細胞の増殖能に変化があるか、IFNγ、TNFαの上昇があるかを検証する。
またin vivoでは遺伝子XをノックアウトしたDCを腫瘍内に局注し、コントロールと比較して腫瘍縮小効果を認めるかを検証する。また腫瘍内、脾臓、リンパ節からDCを抽出し、共刺激因子、MHC classI/IIの発現を評価する。
最終的には候補遺伝子を標的とした阻害剤や抗体を同所移植モデルに投与することで、新規治療法となりうるかを検証する。
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| Causes of Carryover |
研究計画はおおむね順調に進展しており、資金を有効に使用できたため。次年度は引き続き研究用器材、試薬、動物実験施設利用料などに使用する予定である。
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[Presentation] Autophagy inhibition in pancreatic cancer cells augments anti-tumor immunotherapy via dendritic cell activation due to antigen accumulation2024
Author(s)
Koki Oyama, Kohei Nakata, Chikanori Tsutsumi, Bo Zhang, Yuki Mochida, Kento Hirotaka, Naoki Ikenaga, Toshiya Abe, Noboru Ideno, Chika Iwamoto, Kenoki Ohuchida, Keiji Kuba and Masafumi Nakamura
Organizer
55th American Pancreatic Association 2024 Annual Meeting
Int'l Joint Research
