間葉系幹細胞由来エクソソームとシングルセル解析による自己免疫性肝炎の新規治療開発

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K07464
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 阿部 和道 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (30468128)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 敦史 福島県立医科大学, 医学部, 准教授 (40404868) ; 大平 弘正 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (90274951)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: 自己免疫性肝炎 / 間葉系幹細胞 / mir-557 / エクソソーム / シングルセル解析

Outline of Annual Research Achievements

1. メスC57BL/6マウスの肝臓から精製したS-100抗原タンパク（2.5mg/200μL）とcomplete Freund’s adjuvant（CFA, 200μL）をメスC57BL/6マウスに1回/週（day0, day7）に皮下投与し, 投与4週間後に慢性肝炎を発症しAIHマウスモデルとなる.2. ヒト間葉系幹細胞（PromoCell,Heidelberg, Germany）にmiR-557mimicをトランスへクションし, 培養上清のエクソソームを回収率の高い抽出キット（exoRNeasy Serum Plasma Kits ：QIAGEN）を用いて抽出し,miR-557が豊富な間葉系幹細胞由来エクソソームを作成する.3. マウス骨髄由来のマクロファージをmiR-557含有エクソソームと共培養し, 48時間後にマクロファージを採取し,炎症性または抗炎症性サイトカイン, ケモカインのmRNA発現を評価する. 4.以下の2つのグループに分けて,AIHマウスモデルから肝臓を摘出して, 肝炎発症や重症化, 軽減の有無を確認する. また,血清中のALTやIgG,抗核抗体をELISAで測定する. （a）AIHマウスモデル群, （b）AIHマウスモデルのmiR-557を含有するエクソソーム投与群. 5. エクソソームがAIHマウスモデルの肝臓に及ぼす影響を確認するために, AIHマウスモデルに（a）miR-557含有のエクソソーム（5μg）投与48時間後に肝臓を採取し, 肝臓の免疫細胞（特にマクロファージやTfh細胞）のシングルセル遺伝子発現解析を行う. さらにGO解析を行なって機能評価を行う.

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

自己免疫性肝炎マウスモデルの作成とエクソソーム作成の準備に時間がかかっているため

Strategy for Future Research Activity

自己免疫性肝炎マウスモデルの作成が進んできたので、今後、mir-557含有のエクソソームを作成し、細胞実験やマウス実験への応用実験を進めていく

Causes of Carryover

自己免疫性肝炎マウスモデル作成、エクソソーム作成の準備に時間がかかっていた。今年度は実験を遂行していく。