Elucidation of MAPK-independent desmoglein reduction via Type 2 inflammation in pemphigus

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K07754
• Research Institution: Kurume University
• Principal Investigator: 古賀 浩嗣 久留米大学, 医学部, 准教授 (40461412)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): TEYE KWESI 久留米大学, 付置研究所, 助教 (30599303) ; 堤 真宏 久留米大学, 医学部, 助教 (40939188) ; 石井 文人 久留米大学, 医学部, 准教授 (80330827)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: 天疱瘡 / デスモグレイン / デスモゾーム / 2型炎症

Outline of Annual Research Achievements

ヒトケラチノサイト細胞株であるKer-CTにCRISPR-Cas9システムを用いてデスモグレイン3(Dsg3)欠損細胞を作製した。その細胞と通常のKerCTの遺伝子発現についてRNAシーケンスで網羅的に解析した結果、Dsg3欠損Ker-CTでペリオスチンをコードするPOSTN遺伝子の発現増加を認めた。ペリオスチンは主に線維芽細胞から産生される蛋白でTh2関連サイトカインであるIL-4、IL-13の刺激で産生され、それが表皮ケラチノサイトに結合する事でTSLPが産生されTh2型炎症に寄与することから、天疱瘡における2型炎症に関与している可能性が考えらえた。しかし、Dsg3欠損Ker-CTを用いてペリオスチン抗体でウエスタンブロッティングを行ったが、蛋白発現量が低いためか検出することができなかった。次に、RNAシーケンスでDsg3欠損Ker-CTにおいてフィラグリンをコードするFLG遺伝子の発現が低下していることに着目した。フィラグリンはIL-4、IL-13により発現が低下することが知られている。Dsg3欠損Ker-CTでフィラグリン抗体を用いてウエスタンブロッティングを行ったが通常のKer-CTとの蛋白量の発現の差が明確でなかったため、天疱瘡患者病変部皮膚と健常人皮膚を用いて免疫組織化学染色でフィラグリンの発現を比較した。一部の天疱瘡患者皮膚では発現が低下していると考えられたため、他の方法でもDsg3発現低下によりフィラグリン発現が低下している事を示す必要があると考えて追加実験を行っている。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

当初候補遺伝子として考えられたPOSTN遺伝子にコードされるペリオスチンの発現亢進がDsg3欠損Ker-CTで確認できず、他の候補遺伝子で実験を進める必要があった。

Strategy for Future Research Activity

ケラチノサイトにDsg3抗体を添加するとDsg3発現が減少することが知られており、Ker-CTをDsg3モノクローナル抗体であるAK23の存在下/非存在下で培養したサンプルを用いてRNAシーケンスで発現解析を行う予定である。

Causes of Carryover

次年度使用額が224,633円となったが、本来は本年度中に解析する予定であったRNAシーケンスがサンプル調整の都合で年度内に行えなかったため、次年度に繰り越しとした。そのために生じた次年度使用額である。