自己炎症性疾患・中條-西村症候群におけるmicroRNAの役割の解明

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K07791
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 国本 佳代 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (10438278)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 神人 正寿 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (60401048)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: 中條-西村症候群 / プロテアソーム

Outline of Annual Research Achievements

者末梢血単核細胞あるいは皮膚パラフィン組織(n=5以上)からmiRNeasy Kit (Qiagen)を用いてmicroRNAを抽出した。正常血液および皮膚をコントロールとして使用した。PSMB8発現に関係しうる3つのmicroRNA(miR-125b-5p, -125a-5p, -4319)の発現が患者血液や皮膚でコントロールに比べて変化しているかを調べるため、Mir-X miRNA First Strand Synthesis and SYBR qRT-PCR Kit (Takara)を用いてcDNA化を行い、今後は得られたcDNAを鋳型としてquantitative real-time PCRを行っていく予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

サンプルのcDNA化は終えているため。

Strategy for Future Research Activity

得られたcDNAを鋳型としてquantitative real-time PCRを行う。各microRNAに対応するprimerの配列はmiRBase (http://www.mirbase.org)より取得する。データの解析はThermal Cycler Dice Real Time System ver2.10B (Takara)上で行う。目的とするmicroRNAの相対濃度をstandard curve methodを用いて計算し、同一サンプルのU6濃度によって補正する。上記の3microRNAに発現変化がない場合、PCRアレイ (Qiagen) によりさらに多数のmicroRNA発現を調べ、特異的な発現異常を示すmicroRNAを同定するよう努める。

Causes of Carryover

コロナの影響で研究計画に変更があり、旅費などが残存したため。
今後感染拡大状況を注視しながら計画的に使用する。