2024 Fiscal Year Research-status Report
早発卵巣不全予測マーカー測定法開発と妊孕性温存療法への展開
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23K08865
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
大須賀 智子 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (30778296)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村岡 彩子 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (40930269)
三宅 菜月 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (60962470)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | 早発卵巣不全 / 卵巣顆粒膜細胞 / 卵胞発育 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
早発卵巣不全を事前に予測する方法の開発として、抗POTEF抗体測定法の改良を行っている。特許出願「早発卵巣不全を検査する方法」については、令和６年４月１６日に特許登録となった（第７４７３９３７号）。測定法の改良については、感度の改善を図るため、共同研究者の協力のもと、新たな手法での抗原作成、抗原固相化法、ブロッキング剤、二次抗体の検討を行った。固相化抗原の量と二次抗体の種類、濃度が結果に与える影響が大きく、適切な組み合わせを検討している。今後の多検体測定のため、倫理委員会承認の下、早発卵巣不全患者に同意を得て測定用の血清検体を並行して蓄積している。
POTEFタンパク質の初期卵胞発育と維持へのはたらきについては、薬剤誘導性にPOTEFを発現増強した顆粒膜細胞(CuO-POTE-Flag-HGrC1) と発現増強していない顆粒膜細胞を用いたRNA-Seq解析による発現変動遺伝子の解析の結果、autophagyに関連した機能をもつ遺伝子や、AMHR2の発現変動が認められた。AMHは一次卵胞から小胞状卵胞の顆粒膜細胞で分泌され、休眠卵胞の維持に寄与するとされている。POTEFが発現している顆粒膜細胞では、卵胞の休眠維持の作用がPOTEF dependentとなり、POTEFの発現が低下することでAMHによる卵胞の休眠/活性化のコントロール下になる可能性が考えらえる。CuO-POTE-Flag-HGrC1を用いた蛍光免疫染色により、POTEFの発現に伴うAMHR2や発現変化の検討を行った。POTEF発現にともない、AMHR2の局在が変化するとともに、細胞形態の変容が認められた。これらの表現型変化に関連する分子について、CuO-POTE-Flag-HGrC1を用いた発現や局在の変化の検討を予定している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初予定していた抗POTEF抗体測定につき、抗原作成、抗原固相やブロッキングバッファー、二次抗体の検討を行っている。POTEFの顆粒膜細胞における機能については、薬剤誘導性にPOTEFを発現増強した顆粒膜細胞(CuO-POTE-Flag-HGrC1)と発現増強していない顆粒膜細胞を用いたRNA-Seq解析による発現変動遺伝子解析により、休眠維持に関与するAMHRの発現変動が同定され、CuO-POTE-Flag-HGrC1を用いた機能解析実験を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
抗POTEF抗体測定価測定につき、二次抗体の検討や至適血清希釈濃度の設定を継続する。各条件が固定されたのち、プロトタイプ作成を行う。プロトタイプ作成後に測定に用いる患者血清につき、引き続き、同意書取得と血清の蓄積を行う。
POTEFタンパク質の卵胞顆粒膜細胞における機能については、CuO-POTE-Flag-HGrC1を用いて、RNA-Seqで同定されたAMHRとの関連についての解析を進める。
POTEF発現に伴うAMHRの細胞内局在の変化や細胞の表現型変化について、関連する分子の細胞蛍光免疫染色等により機能解析を進める。
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| Causes of Carryover |
研究分担者や共同研究者との試薬の共有、利活用などにより、初年度の予定より経費を抑えることができたため、次年度使用額が生じた。次年度使用額については次年度以降、効率的な抗POTEF抗体価測定法の確立のため、抗原たんぱく質の精製ほか、ELISA作成、細胞実験による機能解析に必要な物品、試薬の購入に使用し、研究を発展させる。
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