2023 Fiscal Year Research-status Report
再発性呼吸器乳頭腫症の3次元培養細胞を用いた病態解明と新規治療薬の探索
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23K08995
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
甲能 武幸 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (90573410)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
富里 周太 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (00924987)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | HPV / 再発性呼吸器乳頭腫 / 3次元培養 / 腫瘍増殖機構 / 薬剤スクリーニング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
低リスク型ヒトパピローマウイルス（Low Risk type HPV; LR-HPV）に起因する再発性呼吸器乳頭腫症は、HPVがどのように複製・増幅して腫瘍化に至るかという病態の解明は十分に進んでいない。その要因として、これまでLR-HPV感染細胞株の樹立が困難で、in vitroでウイルスの動態を評価する観察系が存在しなかったことが挙げられる。本研究では、First stepとして再発性呼吸器乳頭腫症のpreclinical modelを構築すべく、Conditional Reprogramming (CR)法を活用して、乳頭腫の手術検体から初代培養細胞を樹立し、コラーゲンゲル培養で3次元細胞の作成を行った。
これまで再発性呼吸器乳頭腫13症例の手術検体から初代培養細胞の樹立を試み、12例で成功した(図１)。樹立効率は90%を越え、生着した細胞は継代培養が可能で細胞凍結・解凍後も再増殖することを確認できた。 また、RT-qPCRおよびRNA-ISHにより、10例がHPV6型、2例がHPV11型を含有することを確認した。従来、臨床的にHPV11型由来の腫瘍はHPV6型由来に比べ増殖の勢いが激しいとされているが、本研究で樹立した各細胞のDoubling timeを比較すると、HPV-DNA型の違いによる差は認めなかった。さらに、コントロールとして同一症例の非病変部から採取した正常粘膜上皮からも培養細胞を分離している。次にアテロコラーゲンゲル内で培養した3次元細胞は凍結切片を作成し、免疫染色でCK5やKi67の発現を確認した。このことは、作成した細胞が再発性呼吸器乳頭腫症の腫瘍特性を再現していることを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
10例以上の手術検体から3次元培養作成に成功しており、当初の計画通りに進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、この3次元培養細胞を用いて様々なタンパクの発現や遺伝子解析をすすめ、LR-HPVゲノムの増幅および腫瘍増殖に関与する因子を探索していく。さらに、予後予測や新規治療薬の標的となりうる因子を探ると共に、薬剤スクリーニングによる治療薬候補の探索を行うためのプラットフォームとして活用していく。難治性希少疾患であるLR-HPV感染症の新規治療戦略に結び付けていきたい。
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| Causes of Carryover |
当初計画していた外部委託の実験が次年度以降に繰り越しとなったため、本年度の支出が少なくなった。
次年度は国際学会での発表と論文投稿を予定しており、抗体試薬など含めた物品費も多く支出する予定である。
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