2023 Fiscal Year Research-status Report
特発性肺線維症合併肺癌に関連するCADM1、SPC25遺伝子変異の検討
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23K15220
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
福泉 彩 日本医科大学, 医学部, 助教 (10754509)
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2023-04-01 – 2027-03-31
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| Keywords | 特発性肺線維症合併肺癌 / SPC25 遺伝子変異 / CADM1 遺伝子変異 / 全エクソーム解析 / JAK-STAT経路 / ブレオマイシン誘発マウス肺線維症モデル / CRISPR/Cas9法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
私たちは以前に19例のIPFを有する肺癌（IPF-LC）患者、10例のnon IPF-LC症例の腫瘍および背景肺に対し全エクソーム解析を実施し、IPF-LCに特異的に発現するCADM1、SPC25遺伝子変異を抽出。機能解析の結果、CADM1とSPC25がIPF-LCの診断マーカーおよび治療標的となり得る可能性を示した。
今回、肺扁平上皮癌細胞株においてCADM1がJAK-STAT3経路に対し抑制的な働きをするとの報告（Vallath S et al.SciRep.2016 1;6:24006）、またJAK-STAT3経路とIPFの関わりについて複数報告があることを踏まえ（Montero P et al.Int J Mol Sci.2021 9;22(12):6211）、IPF-LCの発生にCADM1、JAK-STAT3経路が関わっている可能性を考えた。siCADM1を使用してCADM1ノックダウン細胞を作製したところ、JAK-STAT3経路関連蛋白（JAK1、JAK2、STAT3など）の蛋白発現が上がること、加えて、SPC25の蛋白発現が上昇することが示せた。また、siJAK1を使用してJAK1ノックダウン細胞を作成したところ、STAT3のさらにはSPC25の蛋白発現低下を示すことができた。よって、これらから肺癌とくにはIPF-LCにおいてはCADM1およびSPC25がJAK-STAT経路を介し、間質性肺炎の発症および発がんに関わっている可能性を示唆された。
ブレオマイシン誘発マウス肺線維症モデルを作製し、肺線維症におけるSPC25の発現を評価した。その結果、同マウスモデルの肺組織においてはSPC25の蛋白発現が上昇することを示すことができた。
その他、CRISPR/Cas9法を用いてSPC25遺伝子変異導入株を作製し、現在サンガーシーケンス法でその成否について評価を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2023年度に予定していた実験についてはおおよそ進められており、現状予測された結果も得られている状況にある。2024年度末には論文作成を開始できるペースで進められていると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
・CADM1/SPC25、JAK-STAT経路の関係性、および siJAK1を使用したJAK1ノックダウン細胞においてSPC25の蛋白発現が低下することを踏まえ、現在複数のJAK阻害剤を使用して同じくSPC25の発現低下、cell viabilityの抑制可否について検討を行っている。
・肺線維症マウスモデルにLewis lung carcinoma を移植し、肺線維症 環境下で肺癌の動態、およびSPC25/CADM1の発現およびJAK-STAT経路関連因子の蛋白発現について評価を試みている。
・将来的には、SPC25 knock out マウスを使用してブレオマイシン誘発マウス由来肺線維症モデルを作製し、knock out マウスにおいてIPFの重症度が下がることも明らかにしたいと考えている。
・CRISPR/Cas9法を用いた 遺伝子編集に成功している場合には、遺伝子発現解析および細胞の浸潤、増殖能について検討したいと考えている。
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| Causes of Carryover |
vitro実験については当初の予定に比して早期に結果を得ることができた。他方、本年度に得られた結果から、今後vivo実験として ブレオマイシン誘発マウス肺線維症モデルへの肺癌細胞株移植実験やSPC25ノックアウトマウスモデルの作製を予定しており、当該研究への使用を検討したい。
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Research Products
(1 results)
