免疫担当細胞のシングルセル解析による炎症性発癌機構の解明

2024 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23K15470
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 武居 亮平 金沢大学, 医学系, 助教 (90963603)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: 逆流性食道炎 / Barrett食道 / 食道癌 / 腫瘍微小環境 / 免疫

Outline of Annual Research Achievements

本研究は，逆流性食道炎に伴う食道発癌モデル動物を用いて，発癌前・発癌後のBarrett食道，食道癌を中心に免役担当細胞について単細胞の遺伝子発現を網羅的に解析する世界初の研究であり，「Barrett食道から発癌するために必要な免疫学的変化のプロセス」を明らかにするものである．
本研究は慢性炎症性食道発癌モデルとして全胃温存食道空腸吻合を行った食道胃十二指腸逆流モデルラットを作成し、主にBarrett食道が発生する術後20週前後と食道癌が出現する術後40週前後まで飼育後、吻合部食道組織を採取し、フローサイトメトリー、single cell RNA sequenceを用いて、局所に集積する免疫担当細胞のプロファイリングを行う事で、食道発癌前後のBarrett食道、食道癌の免疫環境を比較検討する。本研究から得られる知見で前癌状態から発癌に至る過程で癌微小環境に生じる免疫学的変化を捉えることが可能であると考えている。
20週モデル、40週モデルともに当該年度は飼育を継続しながら、scRNA-seq解析に向けて食道組織からの免疫細胞単離における生存率や再現性の向上を目的としたプロトコール改善を行っている。
今年度に解析に供するモデル動物は順次使用可能な状態となるため、今後は食道組織を採取し、single cell RNA sequenceによる免疫細胞の網羅的解析と、CD4+T細胞（CD14- CD3+CD4+），CD8+T 細胞（CD14- CD3+CD8+ ） ， M1MΦ （ CD11b+CD68+CD86+ ） ， M2MΦ（CD11b+CD68+CD163+）に注目した詳細は解析を行う予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

食道組織からの免疫細胞単離における生存率や再現性の向上を目的とした試薬調整やプロトコール改善に時間を要した。

Strategy for Future Research Activity

計画書のタイムテーブルからはやや遅れているが、今年度中にscRNA-seq、データ解析が可能と考えており、計画書通りに研究を進めていく予定である。

Causes of Carryover

次年度はsxRNA-seqにおける試薬購入や解析データの発表における旅費に使用する予定である。