2023 Fiscal Year Research-status Report
Development of a new animal model for IgA nephropathy and establishment of methods for functional evaluation
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23K19601
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
布施谷 清香 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 産総研特別研究員 (40977542)
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| Project Period (FY) |
2023-08-31 – 2025-03-31
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| Keywords | 糖転移酵素 / 遺伝子改変マウス / IgA腎症 / O型糖鎖 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、新規マウスの作製と糖鎖分析に向けて系の構築を行った。糖鎖プロファイリングを定性的に特定する自動化機器を利用し、血清を用いて再現度高く測定できるプローブを発見した。さらに、2種類の抗糖タンパク質抗体を利用して、特定タンパク質の検出を同時に行い、そのシグナルで糖鎖検出シグナルを正規化することで、定量的な糖鎖プロファイリングを得られるように改良した。本年度は当方法論について3件の学会発表を国内外で行い、議論を重ね、論文を投稿した（査読中）。また、複数回の交配を経て、本年度後期には新規マウスが得られた。結果、当該マウスは尿試験紙検査では陽性とならないものの、予期せず約6ヶ月齢で死亡することが明らかになった。病理学的解析及び詳細な分子動態については来年度解析を行う。加えて、本研究で使用する2種類の糖転移酵素欠損マウスに関して論文を報告した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度はマウスを作製し、生存期間を明らかにした上で組織解析が可能になったため。また、血清を用いた全自動糖鎖プロファイリングシステムを改良することでヒト検体での測定応用が可能となったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
来年度は主に新規マウスの病理学的解析とマウス血清中タンパク質の解析を行う。病理学的解析では、当該マウスの腎切片を用いて、HE染色やPAS染色を行い、糸球体の形態及び機能評価を行う。また、免疫蛍光染色を行い、糸球体へのIgA、補体（C3）及びIgG（免疫複合体）の沈着度を評価する。血清タンパク質の糖鎖構造変化に関しては、1) レクチンを用いた濃縮法と2) 質量分析による解析を検討する。1)では、O型糖鎖構造変化を生じた糖タンパク質を認識するレクチンを用いて濃縮し、ウェスタンブロット解析を行うことで存在量を比較する。または、抗体を用いて濃縮した上で、レクチンブロットやレクチンマイクロアレイによって糖鎖構造変化を確認する。2) では、血清に含まれる高濃度タンパク質（アルブミン、トランスフェリン、IgG）除去画分を用いて、質量分析によって糖タンパク質と糖鎖修飾サイトを確認する。同時に血清中のタンパク質量変動についても評価する。
また、腎組織以外の組織も採取して病理学的解析を行い、新規マウス死亡の原因を特定する。さらに、確立した糖鎖プロファイリングシステムを利用して血清中タンパク質の糖鎖構造変化の迅速な定量的解析を試みる。
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| Causes of Carryover |
本年度は消耗品の一部を運営費交付金にて負担したため支出を抑えられた。一方で、次年度に計画していた血清解析の予備実験では、新たな研究用消耗品が必要である見込みになったため、次年度に充てる計画とした。
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[Presentation] A new simple glyco-check with lectin/antibody dotcoding using a fully automated system2023
Author(s)
Sayaka Fuseya, Ayaka Ono, Hiromi Ootani, Saho Mizukado, Tomomi Obayashi, Nana Tanaka, Kenji Kajiyama, Moe Ashitomi, Shiori Yasuda, Takenori Miyabe, Kazuhiro Nakamura, Osamu Segawa, Kazumi Sawakami, Atsushi Kuno
Organizer
HUPO 2023 Congress
Int'l Joint Research
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