2023 Fiscal Year Annual Research Report
Pathogenesis of HTLV-1-associated myelopathy (HAM) by innate immune analysis and development of new treatment methods
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22H03121
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
久保田 龍二 鹿児島大学, 医歯学域ヒトレトロウイルス学系, 教授 (70336337)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 正和 鹿児島大学, 医歯学域ヒトレトロウイルス学系, 准教授 (20454613)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | HAM / HTLV-1 / 自然免疫 / NKT細胞 / gdT細胞 / TLR |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HAMはヒトレトロウイルスであるHTLV-1によって発症する炎症性脊髄疾患であり、中枢神経にHTLV-1感染細胞と免疫細胞が浸潤し炎症により神経障害が起こり、歩行障害、排尿障害で患者は苦しんでいる。本研究では、①HAMの病態にNKT細胞やgdT細胞を含む自然免疫細胞が関与しているのか、②感染細胞内でのウイルスセンサーであるTLR8からHTLV-1が逃避しているのか、③TLR8増強で感染細胞のウイルス排除を増強できないか、を明らかにすることでHAMの病態解明と新規治療法開発につなげる。
2023年度は①については、HAMの末梢血リンパ球をIL-2添加にて長期培養するとCD56+CD3+細胞が増加し、NKT細胞およびgdT細胞が増加していた。現在、1週間の短期培養でCFSEを用いた増殖細胞を同定できる方法を用いて増殖細胞中の感染細胞、HTLV-1特異的CTLおよび自然免疫細胞の性状解析を行っている。②については、HTLV-1感染細胞株を用いてTLR8の発現をRT-PCRにて検討したところ、非感染細胞株と比べTLR8発現は増加していた。またHTLV-1 tax遺伝子を導入したJPX9細胞を用いてをtaxを発現させるとTLR8の発現は増加した。これは以前の我々の先行研究結果と一致しない結果であった。このため患者末梢血リンパ球よりの非感染細胞と感染細胞を比較したマイクロアレイ解析で検討すると、感染細胞ではTLR8の発現は増加していた。しかし、培養細胞の感染細胞と非培養の非感染細胞を比較すると、大幅にTLR8の発現が抑制されており、さらに培養後の感染細胞と培養前の感染細胞を比較すると、TLR8の発現は低下していた。培養の過程でTLR8の発現は低下することが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本研究のスタートとなった我々の先行研究の一つは、患者由来リンパ球の培養の前後でのHTLV-1感染細胞の遺伝子発現解析で、TLR遺伝子パスウェイが変動しており、かつ培養後の感染細胞でTLR8の発現が著しく低下していることであった。しかしHTLV-1感染細胞株の実験では非感染細胞と比べTLR8の発現は増加しており、またHTLV-1 taxを発現させるとむしろTLR8発現は増加していることがわかり、先行研究結果と一致しないものであった。そのため、この差異の原因を明らかにするための解析に時間を要したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はHAM患者の末梢血リンパ球の長期培養で増加してくるNKT細胞やgdT細胞がHTLV-1感染細胞を認識するのかを、これらの細胞とHTLV-1感染細胞の分離とその後の混合培養にて検討していく。その後HAMの中枢神経組織を用いて自然免疫細胞の脊髄での動態を病理学的に検討する。
さらに、感染細胞内でのウイルスセンサーであるTLR8からHTLV-1が逃避しているのかを解析していく。
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