2014 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロＲＮＡを指標にして癌幹細胞を標的破壊する抗癌ウイルス療法の新戦略
| Project/Area Number |
24300340
|
|---|
| Research Institution | Tottori University |
|---|
Principal Investigator |
中村 貴史 鳥取大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70432911)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | 癌 / ウイルス療法 / トランスレーショナルリサ ーチ / 遺伝子治療 / バイオテクノロジー |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
抗癌ウイルス療法は、感染した細胞・組織内で増殖伝播しながらそれらを死滅させるというウイルス本来の性質を癌に利用する方法である。これまでの研究により、癌におけるマイクロRNA（miRNA）の特性を利用して、癌細胞特異的に増殖し破壊するワクシニアウイルスMDVVの開発に成功した。そこで本研究では、現行の治療法に抵抗性を示す癌幹細胞に焦点を当て、その自己再生能や発癌性の制御にmiRNA（let7a）の発現低下が関わっていることに注目し、これを指標にして癌幹細胞を根絶する新しい抗癌ウイルス療法の確立を目指している。
本研究では、担癌モデルマウスにおいて、MDVVの高い抗癌効果と安全性を実証するとともに、インターロイキン12を発現するように組込んだMDVV-IL12の抗癌効果は癌免疫療法との併用作用によって増強することを実証した。そこでMDRVVの臨床応用に向けて、ウイルス製剤のGMP製造法と品質管理システムのための基盤技術を構築するため、I）細胞の大量培養工程、II）ウイルスの増殖・回収・抽出工程、III）精製工程からなるGMP製造工程の最適条件を検討した。工程I）では、MDRVVを産生するための宿主細胞の決定、工程II）では、感染時の細胞密度、ウイルス量、及びウイルス感染細胞の培養時間、ウイルス感染・増殖の最適条件を決定した。一方、MDVVの品質管理のために、ウイルスに挿入したmiRNA標的配列のシークエンス解析、ウイルスゲノムの制限酵素切断による解析、外来治療遺伝子の発現解析によって、ウイルスの品質を評価する検定法を確立した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究にて提案した４つの研究項目のうち、担癌マウスモデルにおいてMDVVの抗癌効果と安全性を評価する、癌免疫療法との併用によってMDVVの抗癌効果を増強する、臨床応用を視野に入れMDVVのGMP製造や品質管理に関する基盤技術を構築する項目は、おおむね順調に進展している。一方、癌患者臨床検体を用いてMDVVの抗癌効果を予測する項目は、やや遅れている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
本研究課題は、26年度の完了予定であったが、研究方式の決定の困難の事由により、その問題は解決したものの年度内の事業完了が困難になった。それゆえ、27年度に当初予定していた実験を継続して実施し、実験結果の分析を行い、研究成果取りまとめを行ってきたため、27年度が最終年度となる。
|
| Causes of Carryover |
平成２６年６月、動物実験に使用するためのMDVV、及びMDVV-IL12を増殖・精製したところ、その一部のウイルスにおいて挿入した外来遺伝子の発現が消失するという問題が生じた。研究遂行上、この影響を排除する必要があることから、外来遺伝子発現の安定性の検討と、その発現が消失しない新たなウイルスの作出に７か月を要し、年度内の事業完了が困難になったため。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
実験に用いる試薬・プラスチック器具・マウス・動物実験器具の購入、研究成果発表のための旅費、及び学会誌投稿経費としてそれぞれ使用する計画である。
|
