2013 Fiscal Year Annual Research Report
工業展開を指向した細胞表層提示の網羅的解析「Ｄｉｓｐｌｏｍｅ」の確立
| Project/Area Number |
24360342
|
|---|
| Research Institution | Kobe University |
|---|
Principal Investigator |
近藤 昭彦 神戸大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (40205547)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 勉 神戸大学, 工学(系)研究科(研究院), 准教授 (90436551)
荻野 千秋 神戸大学, 工学(系)研究科(研究院), 准教授 (00313693)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| Keywords | 細胞表層提示 / バイオリファイなリー |
|---|
| Research Abstract |
本年度は、アンカータンパク質に着目したDisplomeの構築を行った。提示させたい目的タンパク質によっては、アンカータンパク質のC末端と、目的タンパク質のN末端を連結させた場合に高活性を示すものがある。目的タンパク質にBGLを用い、膜に局在すると予測されるタンパク質を網羅的に融合してそのアンカーとしての活性を評価した。大腸菌、コリネ菌について評価を行ったところ、現在までに大腸菌で５種類、コリネ菌で３種類のアンカータンパク質候補を新たに見いだした。特に、大腸菌においてはゲラム陰性菌であるため、予想よりもアンカータンパク質が見いだしにくい結果となった。また、得られたアンカータンパク質に対して異なるセルラーゼ（キシロシダーゼ、エンドグルカナーゼ、キシラナーゼなど）を提示させて発現させたところ、おおよそ全てのセルラーゼをについて活性を保ったまま表層に提示することができたが、その活性は十分とは言えず、それぞれのセルラーゼに対して最適なアンカーを見いだすことが必要であると示唆された。また、これらセルラーゼを提示した微生物を用いてオリゴ糖を炭素減とした増殖能の評価を行った。その結果、グルコースなどの単糖に比べて増殖がよいという予想外の結果が得られており、現在代謝解析等でその原因について検討を行っている。また、上記以外の微生物についても同様の検討を進めており、これらの知見を統合して表層提示における一般性について検討を進めている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
表層提示のアンカーのカタログ化、機能評価、それぞれ順調に進んでおり、計画通りである。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後はバイオマスからの物質生産能を向上させるためのアプローチと平行して表層提示技術の開発を進めていく。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
次年度は代謝解析のための分析試薬が多く必要となるために、次年度使用額が生じた。
表層提示微生物における代謝解析に使用する。
|
-
[Journal Article] Display of active beta-glucosidase on the surface of Schizosaccharomyces pombe cells using novel anchor proteins2013
Author(s)
Tanaka, T., Matsumoto, S., Yamada, M., Yamada, R., Matsuda, F., Kondo, A.
-
Journal Title
Applied Microbiology and Biotechnology
Volume: 97
Pages: 4343-4352
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Direct L-lysine production from cellobiose by Corynebacterium glutamicum displaying beta-glucosidase on its cell surface.2013
Author(s)
Adachi, N., Takahashi, C., Murota, N., Yamaguchi, R., Tanaka, T., Kondo, A
-
Journal Title
Applied Microbiology and Biotechnology
Volume: 97
Pages: 7165-7172
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Direct cadaverine production from cellobiose using beta-glucosidase displaying Escherichia coli2013
Author(s)
Ikeda, N., Miyamoto, M., Adachi, N., Nakano, M., Tanaka, T., Kondo, A.
-
Journal Title
AMB Express
Volume: 3
Pages: 67
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
