ACC合成酵素の脱リン酸化を介してエチレン生合成を調節するホスファターゼの解析

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24380020
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 森 仁志 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (20220014)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 翻訳後制御 / 脱リン酸化 / エチレン / ホスファターゼ / ACC合成酵素

Research Abstract

エチレンは果実の成熟、野菜・花卉の鮮度保存など園芸作物に大きな影響を与える。エチレン生合成経路の鍵となるACC合成酵素は、リン酸化によって安定化され、脱リン酸化によって不安定化(分解)される。本研究では、ACC合成酵素のリン酸化・脱リン酸化を介した翻訳後制御機構を解析することによって、エチレン生成調節機構を明らかにする。ACC合成酵素の脱リン酸化に関わると推測されているProteinPhosphatase2A(PP2A)は、3つのサブユニットA、B、Cから成り、それぞれが複数の遺伝子群から構成され、構成サブユニットの組合せにより多種多様なPP2Aが存在する。これらサブユニットのうち、Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた。シロイヌナズナには16種のBサブユニット遺伝子が存在する。エチレンを過剰生成するシロイヌナズナの突然変異体rcnlは、PP2Aの1つのAサブユニット(RNCl)を欠失している。PP2Aに特異的な阻害剤ミクロシスチン-LRをリガンドにしたアフィニティカラムを用いて、野生型と突然変異体rcnlからPP2Aをそれぞれ単離した。iTRAQ法により質量分析計を用いて、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。この選抜されたB"タイプとACC合成酵素の結合を、酵母のtwo-hybrid systemで検討したが、同定できなかった。再度、条件を変えて解析する必要がある。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

予定通り計画に従って研究は行っているが、単離されたPP2AのBサブユニットはtwo-hybrid systemでは予想通りの成果にならず、同定されていない。

Strategy for Future Research Activity

two‐hybrid systemの条件を変えて、再度解析する。PP2Aをミクロシスチン-LRで単離したが、Aサブユニットの抗体を用いて、さらに単離を試み質量分析計で解析する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

two-hybridsystem、質量分析計の解析、BサブユニットのT-DNAタグラインの選抜およびRNAiによる機能の解析を行う。