2014 Fiscal Year Annual Research Report
酵素による難分解性ポリマーの分解・除去・加工技術の開発
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24380055
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
金谷 茂則 大阪大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (30273585)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | クチナーゼ / 飽和変異 / ポリエステル / サチライシン / プリオン / カルシウム結合部位 / メタゲノム / セルラーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）LC-cutinaseの高活性化と安定化：LC-cutinaseの基質結合部位を形成するTrp190、Val212、Phe243に同時に飽和変異を導入し、活性を示す変異体をスクリーニングした。その結果、LC-cutinaseが活性を示すためには190番目のアミノ酸はTrp、Tyr、Pheなどの芳香族アミノ酸でなければならないこと、212番目のアミノ酸はVal、Leu、Ileなどの長鎖脂肪族アミノ酸であるのが望ましいことを明らかにした。
（２）LC-cutinaseによるポリエステルの表面加工：染色加工試験用ポリエステル白布をLC-cutinaseで処理した後、電子顕微鏡により線維表面を観察した結果、LC-cutinaseにより繊維表面のPETオリゴマーが除去され、繊維表面がきれいになることが分かった。
（３）Tk-SPの高活性化と安定化：Tk-SPのCa2サイトにAsp474→Alaの変異を導入することにより、Tk-SPの活性は変化しないがEDTA存在下における安定性が大きく向上することを明らかにした。
（４）Tk-subtilisinによる異常プリオン分解機構の解析：プリオン病に感染したマウス脳ホモジネートをプロテアーゼで処理し、その培養細胞（N2aC24 cell）感染性を調べることにより、プロテイナーゼKで処理するよりTk-subtilisinで処理する方が感染性は低下することを明らかいした。
（５）コンポスト由来新規セルラーゼの構造と機能の解析：枝葉コンポストからメタゲノム法により単離した１０種類の新規セルラーゼのうち、N末端にflexible loop（FL）をもつLC-CelAとIg-likeドメインをもつLC-CelGの結晶構造を決定した。また、FLが安定性に寄与すること、Ig-likeドメインが安定性、活性、フォールディングに寄与することを明らかにした。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Structural and biochemical characterization of a metagenome-derived esterase with a long N-terminal extension.2015
Author(s)
Okano, H., Hong, X.,, Kanaya, E., Angkawidjaja, C., and Kanaya, S.
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Journal Title
Protein Sci.
Volume: 24
Pages: 93-1041
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Structure, activity and stability of metagenome-derived glycoside hydrolase family 9 endoglucanase with an N-terminal Ig-like domain.2015
Author(s)
Okano, H., Kanaya, E., Ozaki, M., Angkawidjaja, C., and Kanaya, S.
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Journal Title
Protein Sci.
Volume: 24
Pages: 408-419
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Structural basis for salt-dependent folding of ribonuclease H1 from halophilic archaeon Halobacterium sp. NRC-1.2014
Author(s)
You, D.-J., Jongruja, N., Tannous, E., Angkawidjaja, C., Koga, Y., and Kanaya, S.
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Journal Title
J. Struct. Biol.
Volume: 187
Pages: 119-128
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Structure and stability of metagenome-derived glycoside hydrolase family 12 cellulase, LC-CelA, a homolog of Cel12A from Rhodothermus marinus.2014
Author(s)
Okano, H., Ozaki, M., Kanaya, E., Kim, J.-J., Angkawidjaja, C., Koga, Y., and Kanaya, S.
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Journal Title
FEBS Open Bio
Volume: 4
Pages: 936-946
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Rational design of a glycosynthase by the crystal structure of β-galactosidase from Bacillus circulans (BgaC) and its use for the synthesis of N-acetyllactosamine type 1 glycan structures.2014
Author(s)
Henze, M., You, D.-J., Kamerke, C., Hoffmann, N., Angkawidjaja, C., Ernst, S., Pietruszka, J., Kanaya, S., and Elling, L.
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Journal Title
J. Biotechnol.
Volume: 191
Pages: 78-85
DOI
Peer Reviewed
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