2012 Fiscal Year Annual Research Report
イヌの変性性脊髄症における神経変性メカニズムの解明と抗体療法の前臨床試験
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24380169
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
神志那 弘明 岐阜大学, 応用生物科学部, 准教授 (50506847)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
漆谷 真 滋賀医科大学, 分子神経科学研究センター, 准教授 (60332326)
加藤 信介 鳥取大学, 医学部, 准教授 (60194817)
前田 貞俊 岐阜大学, 応用生物科学部, 教授 (50377694)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 変性性脊髄症 / ミスフォールド / 神経変性 / ALS / ミクログリア |
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| Research Abstract |
本研究の目的は,変性性脊髄症(DM)における神経細胞死の分子病態メカニズムを解明し、活性型ミクログリアの制御に着目したDMに対する分子標的治療の有効性を明らかにすることである。H24年度は計画を一部変更し、イヌ変異型SOD1蛋白特異的モノクローナル抗体の作製を開始した。野生型および変異型(E40K)リコンビナントイヌSOD1蛋白をそれぞれマウスに免疫し、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを33株作製した。これら33株から、イヌ変異型SOD1蛋白特異的抗体産生クローンをELISA法により5株選択した。それぞれのモノクローナル抗体を用いて、イヌ野生型および変異型SOD1遺伝子導入培養細胞に対する免疫染色により、イヌ変異型SOD1蛋白に対し特異性の高いモノクローナル抗体産生クローン2株が得られた。また、SOD1遺伝子型が正常型ホモ接合体、ヘテロ接合体、変異型ホモ接合体を有する剖検脊髄を使用し、抗体の特異性の検証を開始した。モノクローナル抗体作製時に得られたポリクローナル抗体による免疫染色では、変異型ホモ接合体症例の脊髄神経細胞内にはSOD1陽性の凝集体様構造物が検出され、変異型SOD1蛋白の凝集がDMの病態発生に関与している可能性が示された。DM剖検脊髄からのミクログリアの分離と培養は手法がまだ確立されていないため、H25年度に引き続き継続する。H24年度はDM症例の剖検および病理組織学的検査を11例実施し、組織学的知見の蓄積を行っている。これらの情報は、抗体療法を実施する際の非治療群の情報として活用される。また、これらの症例からの脊髄および脳組織はH25年度以降に行う抗体のスクリーニングや病態解明の解析に使用する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
H24年度はDM症例からのミクログリアの分離を行い、DM病態発生における活性型ミクログリアの役割について検討する予定であったが、技術的な問題から分離法はまだ確立できていない。そのため、計画の一部を変更しイヌ変異型SOD1蛋白特異的モノクローナル抗体の作製を開始した。現在までに変異型蛋白に対し特異性の高い抗体が得られており、H25年度以降の研究に活用できると思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在までに取り組んでいるDM剖検脊髄からのミクログリアの分離はH25年度も継続する予定である。分離法が確立できない場合には、イヌキメラモノクローナル抗体の作製を進め、早期に実験犬に対する髄腔内投与の安全性試験を開始できる準備にとりかかる。
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[Journal Article] Genotyping Assays for the Canine Degenerative Myelopathy-Associated c,118G>A (p.E40K) Mutation of the SOD1 Gene Using Conventional and Real-Time PCR Methods : A High Prevalence in the Pembroke Welsh Corgi Breed in Japan.2013
Author(s)
Chang H.S., Kamishina H., Mizukami K., Momoi Y., Katayama M., Rahman M.M., Uddin M.M., Yabuki A., Kohyama M., Yamato O.
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Journal Title
Journal of Veterinary Medical Science
Volume: (in press)
Peer Reviewed
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[Presentation] イヌの変性性脊髄症における変異型SOD1蛋白凝集体の証明2012
Author(s)
中前早百合, 漆谷真, 加藤信介, 酒井洋樹, 大和修, 内田和幸, 小川瑞恵, 津久井利広, 鈴木理恵子, 前田貞俊, 神志那弘明
Organizer
第154回日本獣医学会学術集会
Place of Presentation
岩手大学(盛岡市)
Year and Date
2012-09-16
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