2012 Fiscal Year Annual Research Report
新規抗糖鎖抗体を用いた慢性炎症性疾患における糖鎖の機能解明
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24390018
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
川島 博人 静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (50260336)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 康之 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (80160034)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | リンパ球ホーミング / 糖鎖 / 抗糖鎖抗体 / シアリルルイスX / L-セレクチン / E-セレクチン / P-セレクチン / 炎症 |
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| Research Abstract |
本研究では、独自に開発した方法論により新規抗フコシル化糖鎖抗体を樹立するとともに、それをプローブとして用いで1曼性炎症性疾患における糖鎖の機能を解明することを目的とする。平成24年度は、以下の様に研究を進めた。はじめに、フコース転移酵素Fuc-TVII、硫酸基転移酵素GlcNAc6ST-2、ο-型糖鎖のコア構造を合成する糖転移酵素Core1β3GlcNAcTおよびCore2GlcNAcT、およびコアタンパク質CD34をコードする遺伝子の全てを安定発現する多重遺伝子発現株をアジュバントとともに腹腔内注射することにより、フコース転移酵素Fuc-TIV/Fuc-TVIIダブルノックアウトマウス(DKOマウス)を免疫した。血清中の抗体価の上昇を親株および多重遺伝子導入株への反応性の違いで確認した後、常法に従って脾臓B細胞とマウスミエローマとのハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマの培養上清中の抗体価を確認後、限界希釈法により抗体産生クローンを得た。さらに、それらのクローンのうち、野生型マウスのHEVに反応し、フコース転移酵素DKOマウスのHEVには反応しない抗糖鎖抗体産生クローンを組織染色により選別した。その結果、2つの陽性クローンを得ることができた。これらのクローンの産生する抗フコシル化糖鎖抗体の糖結合特異性を多価糖鎖プローブを用いた
ELISAで調べたところ、フコシル化糖鎖の一種であるシアリルルイスXに特異的に結合することが明らかとなった。シアリルルイスX糖鎖は炎症巣に浸潤する白血球に発現し、炎症血管上のP-セレクチン、E-セレクチンのリガンドとして働く糖鎖構造であることから、本年度に得られた抗糖鎖抗体は、次年度以降に行う慢性炎症性疾患における糖鎖機能の解析に有用なプローブになると考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画通りに1頂調に研究が進展し、シアリルルイスX糖鎖に対する新しい抗体の樹立に成功したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の研究計画通りに新規抗糖鎖抗体の樹立に成功したので、同抗体を用いて慢性炎症性疾患における糖鎖の機能解析を進める。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
同一性能の物品の場合なるべく安価なものを購入するなどの経費節減努力により、基金助成金のうち一部を次年度使用額として確保することができた。これを翌年度の研究費と合わせて使用することにより、研究計画を遅滞なく遂行する予定である。
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