2012 Fiscal Year Annual Research Report
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24390057
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
桑木 共之 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (80205260)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 防衛反応 / オレキシン / 小胞グルタミン酸輸送体-2 / 遺伝子改変マウス / 体温調節 / ストレス / 発熱物質 / 低温環境 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、オレキシンニューロン内に共存するオレキシン以外の神経伝達(修飾)候補物質が防衛反応に果たす役割を検討することである。そのために以下の実験を行った。
(1)オレキシンニューロン特異的vGLUT2欠損マウスの作成とその確認
Vesicular glutamate transporter-2(vGLUT2)遺伝子にlox-P配列を挿入したマウスとオレキシンプロモーターの制御下にCre遺伝子を発現するようにしたマウスとを掛け合わせてオレキシンニューロン特異的vGLUT2欠損マウスを作成した。遺伝子型を尻尾のbiopsyサンプルを用いたPCR解析し、さらに抗vGLUT2抗体と抗オレキシン抗体とを用いた免疫二重染色法で脳切片を染色することによって目的のマウスが出来たことを確認した。比較のためのオレキシンノックアウトマウスおよびオレキシンニューロン破壊マウスも繁殖・維持した。
(2)共存神経伝達物質候補の役割の解明
上述の実験と並行して、オレキシン神経細胞に共存する神経伝達物質候補がストレス防衛反応に果たす役割に関して薬理学的に検討じた。脳室内投与用カニューレと血圧・体温測定用テレメーターとの埋め込み手術を予め施しておいた野生型マウスまたはオレキシン欠損マウスを用い、脳室内に各種の神経伝達物質受容体阻害剤を前投与した後でストレスを与えた。ストレス刺激として、エアージェットストレス、低温暴露、暑熱暴露、発熱物質の静脈内投与を用いた。発熱物質であるPGE2の投与による体温上昇はグルタミン酸受容体阻害剤で抑制されたがオレキシン受容体阻害剤では抑制されなかった。すなわち、防衛反応を構成する生体反応の内、体温上昇に関しては予想どおりオレキシンニューロン内に共存するグルタミン酸の関与が高いことが示唆され、オレキシンニューロン特異的vGLUT2欠損マウスの作成意義が明確になった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
オレキシンニューロン特異的vGLUT2欠損の確認のための免疫組織化学実験に手間取ったものの、最終的にきちんと確認することが出来た。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の計画通りに、オレキシンニューロン特異的vGLUT2欠損マウスの防衛反応の評価、ならびに出力神経回路の詳細に関する研究を推進する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
消耗品の購入にキャンペーン等を利用して節約に努めたためにわずかな直接経費次年度使用額が生じたが、消耗品の価格は流動性が高いので、次年度の研究費に充当する。
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