2013 Fiscal Year Annual Research Report
Ｃ型肝炎ウイルス粒子形成におけるゲノムパッケージングの分子機構
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24390111
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
鈴木 哲朗 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00250184)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 昌彦 浜松医科大学, 医学部, 助教 (50385423)
鈴木 亮介 国立感染症研究所, その他部局等, 研究員 (50342902)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | C型肝炎ウイルス / パッケージング / 複製 |
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| Research Abstract |
(1) HCVゲノムRNAのパッケージングに必要なHCV RNA領域の同定
昨年度、HCV RNA 3’末端側の非翻訳領域（3’UTR）がゲノムパッケージングに働きうること、その中でもstem-loop領域が重要ある可能性が示唆された。3’UTRには3カ所のstem-loop構造（末端側からSL1, SL2, SL3）が存在する。本年度、詳細な部分変異解析を進めた結果、ゲノムパッケージングにはSL1及びSL2が特に重要であることを見出した。一方、HCV 3’UTR配列は非HCV遺伝子に対してもHCV粒子へのパッケージングシグナルとして機能するかを調べるため、GFP遺伝子の末端にHCV 3’UTRを付加してCore～NS2発現プラスミド及びNS3～NS5B発現プラスミドと共に細胞へ導入しパッケージング能を解析した。その結果、GFP遺伝子はHCV 3’UTR付加によってHCV粒子に取り込まれることが示された。3’UTRをHCVパッケージングシグナルと結論づけた。
(2) HCV粒子内に含まれる遺伝子の網羅的解析
HCV粒子に中には選択性を持ってHCVゲノムが取り込まれるのか、非HCV遺伝子も含まれるのか、を明らかにするため部分精製HCV粒子からRNAを抽出しcDNAを次世代シークエンサーで網羅的に解析した。その結果、HCV粒子内のHCV配列の大部分は全長遺伝子であること、HCV配列以外に宿主細胞由来の人遺伝子も数多く検出されることが示された。断片化されたHCV遺伝子はminor populationであったことから、ゲノムサイズのHCV遺伝子が選択的にパッケージングされる機構が機能していることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
当初計画であったHCVサブゲノム遺伝子を用いた解析だけでなく、非HCV遺伝子（GFP）についてもHCV粒子への取り込み効果を示すことによって、HCV 3’UTRがパッケージングシグナルとして働くことを結論づけることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
ゲノムパッケージングに重要なHCV Core領域の同定：Coreに存在する３カ所の塩基性アミノ酸クラスター各々を変異させたHCVゲノムを作製する。各変異ゲノムあるいは野生型HCVゲノムをHuh7.5.1細胞へ導入し、HCV粒子産生能を解析する。
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[Journal Article] Antiviral activity of glycyrrhizin against hepatitis C virus in vitro.2013
Author(s)
107. Matsumoto Y, Matsuura T, Aoyagi H, Matsuda M, Hmwe SS, Date T, Watanabe N, Watashi K, Suzuki R, Ichinose S, Wake K, Suzuki T, Miyamura T, Wakita T, Aizaki H
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Journal Title
PLoS One
Volume: 8
Pages: e68992
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] HCV NS3 protease enhances liver fibrosis via binding to and activating TGF-β type I receptor.2013
Author(s)
108. Sakata K, Hara M, Terada T, Watanabe N, Takaya D, Yaguchi SI, Matsumoto T, Matsuura T, Shirouzu M, Yokoyama S, Yamaguchi T, Miyazawa K, Aizaki H, Suzuki T, Wakita T, Imoto M, Kojima S.
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 3
Pages: 3243
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hepatitis C virus NS3/4A protease inhibits complement activation by cleaving complement component 4.2013
Author(s)
109. Mawatari S, Uto H, Ido A, Nakashima K, Suzuki T, Kanmura S, Kumagai K, Oda K, Tabu K, Tamai T, Moriuchi A, Oketani M, Shimada Y, Sudoh M, Shoji I, Tsubouchi H.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 8
Pages: e82094
DOI
Peer Reviewed
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