2012 Fiscal Year Annual Research Report
細胞核内タンパク質品質管理機構の解明によるポリグルタミン病の新規病態解明
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24390220
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
岩田 淳 東京大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (40401038)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ユビキチン / ポリグルタミン / 細胞核 / タンパク質品質管理 / HDAC |
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| Research Abstract |
細胞質,細胞核において異なる働きを持つタンパク質品質管理機構に注目し,スクリーニングを行った.検出系としてはポリグルタミンタンパク質ハンチンチンのexon-1にGFPを付加したコンストラクトを安定的に発現する細胞系を構築した.ポリグルタミン鎖は25,47,72,97の4種類であり,それぞれNES,NLSを付加しており,細胞核特異的,細胞質特異的な発現を実現している.細胞株の確立にはフローサイトメトリー(FACS)を利用したため,従来のコロニー採取による細胞株の構築の際に問題となるクローニングによる特異的形質の獲得は回避されている.これらの細胞を使用して,HDACの機能をスクリーニングした.その結果特定のHDACにおいて細胞質と細胞核で凝集タンパク質の量に与える影響の異なることを同定した.方法としてはRNAi,過剰発現,そして特異的阻害薬の3方法を使用し,同様の結果を得ている.これらについて,凝集タンパク質の発現は蛍光顕微鏡ウェスタンブロットにて確認している.
今年度はこのメカニズムを詳細に理解する事を目標とした.HDACによるアセチル化増加をきたす分子についてスクリーニングし,ポリグルタミンタンパク質,特定の分子シャペロン等のHDACによるアセチル化亢進の程度を評価した.これにより,ポリグルタミンタンパク質のアセチル化の亢進,分子シャペロンのアセチル化亢進は否定されたため,現在はタンパク質品質管理機構に関与する様々なタンパク質についてHDACの影響を検討する事とした.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
細胞核,細胞質においてポリグルタミンタンパク質の分解に関与する異なる働きを持つ重要分子を同定しているため.
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| Strategy for Future Research Activity |
HDACの働きがポリグルタミンタンパク質の分解に関与する機構について詳細に検討する.
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
HDACによるアセチル化亢進,低下を来すタンパク質につき,網羅的に検討する.前年度基金残余分については分子生物学消耗品に充てる.
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[Journal Article] Familial amyotrophic lateral sclerosis with novel A4D SODl mutation with late age at onset and rapid progressive course.2013
Author(s)
Hiroya Naruse, Atsushi Iwata. Yuji Takahashi, Kazuaki Ichihara, Satoshi Kamei, Masato Yamatoku, Toshikazu Hirayama, Naoki Suzuki, Masashi Aoki, Toji Miyagawa, Jun Shimizu, Shoji Tsuji, Jun Goto
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Journal Title
Neurology and Clinical Neuroscience
Volume: 1
Pages: 45-47
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] CSF1R mutations identified in three families with autosomal dominantly inherited leukoencephalopathy.2012
Author(s)
Jun Mitsui, Takashi Matsukawa, Hiroyuki Ishiura, Koichiro Higasa, Jun Yoshimura, Taro L. Saito, Budrul Ahsan, Yuji Takahashi, Jun Goto, Atsushi Iwata, Mari Yoshida, Shinichi Morishita, Shoji Tsuji.
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Journal Title
Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet.
Volume: 159B(8)
Pages: 951-957
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The TRK-fused gene is mutated in hereditary motor and sensory neuropathy with proximal dominant involvement (HMSN-P).2012
Author(s)
Hiroyuki Ishiura, Wataru Sako, Mari Yoshida, Toshitaka Kawarai, Osamu Tanabe, Jun Goto, Yuji Takahashi, Hidetoshi Date, Jun Mitsui, Budrul Ahsan, Yaeko Ichikawa, Atsushi Iwata, Hiide Yoshino, Yuishin Izumi, Koji Fujita, Kouji Maeda, Satoshi Goto, Hidetaka Koizumi, Ryoma Morigaki, Masako Ikemura, Naoko Yamauchi, Shigeo Murayama ; Garth A Nicholson, Hidefumi Ito, Gen Sobue, Masanori Nakagawa, Ryuji Kaji, Shoji Tsuji.
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Journal Title
American Journal of Human Genetics
Volume: 91
Pages: 320-329
DOI
Peer Reviewed
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