2012 Fiscal Year Annual Research Report
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24390221
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
大野 欽司 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80397455)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
増田 章男 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (10343203)
伊藤 美佳子 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60444402)
大河原 美静 名古屋大学, 高等研究院, 特任講師 (80589606)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 先天性筋無力症候群 / 神経筋接合部 / RSPO2 / ColQ / Wnt |
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| Research Abstract |
マウス脊髄前角細胞のlaser capture microdissectionのAffymetrix exon array解析とIllumina HiSeq 2000によるRNA-Seq解析によりWnt結合因子Rspo2 (R-spondin 2)が脊髄前角細胞特異的に発現をすることを同定した。Rspo2は脊髄前角由来細胞株の神経軸索延長を促進する効果があることを見出した。さらにRspo2はマウス筋芽細胞C2C12由来筋管細胞においてagrin非存在下にアセチルコリン受容体の集積を促進する作用を有することを見出した。Rspo2の神経筋接合部における受容体がLGR5であることを同定した。Rspo2ノックアウトマウスは呼吸不全のために出生後死亡するが、胎生期のNMJの解析にてmotor neuronのterminal branchingの数の減少とNMJの形成不全を同定し、Rspo2はagrinに続く新規のNMJ形成促進因子であることを明らかにした。先天性筋無力症候群(congenital myasthenic syndromes, CMS)12症例のexome capture resequencing解析の中でRSPO2, LGR5のSNVを複数同定し、これらのSanger法による確認を行うとともに病的意義の検討を開始している。
さらに本邦CMS 3症例において5種類のCOLQ変異を同定し、density gradient ultracentrifugation, in vitro overlay assay、in vitro plate-binding assay、AAV8-mutant COLQによるColq-/-マウスの治療実験によりColQ C末端ドメインがMuSKとの結合を阻害することにより病原性を発揮することを同定し報告を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ほぼ当初の研究計画通りにRspo2の機能解析を行ってきているが、Rspo2ヘテロノックアウトの妊孕性が低下しノックアウトマウスが生まれない事態が発生し、やや研究が遅れている。COLQ遺伝子変異の解析を終了し成果を報告することができた(in press)。
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| Strategy for Future Research Activity |
Rspo2の解析を終了させる結果を投稿する予定である。本邦のアセチルコリン受容体サブユニット遺伝子変異の研究も追加実験を終了させ論文を投稿する予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
平成24年9月、Rspo2ヘテロノックアウトの妊孕性が低下しノックアウトマウスが生まれない事情が発生した。ヘテロノックアウト別個体の成長を待つ必要があった。また、Rspo2ノックアウト胎児マウスの神経筋接合部の形態解析・超微形態解析を行う形態異常のため電顕を含む病理解析に予想以上の時間を必要としているため、予定より実験が遅延した。
Rspo2ノックアウト胎児マウスの神経筋接合部の形態解析・超微形態解析を行う。
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[Journal Article] Exome sequencing of senescence-accelerated mice (sam) reveals deleterious mutations in degenerative disease-causing genes2013
Author(s)
Tanisawa K, Mikami E, Fuku N, Honda Y, Honda S, Ohsawa I, Ito M, Endo S, Ihara K, Ohno K, Kishimoto Y, Ishigami A, Maruyama N, Sawabe M, Iseki H, Okazaki Y, Hasegawa-Ishii S, Takei S, Shimada A, Hosokawa M, Mori M, Higuchi K, Takeda T, Higuchi M, Tanaka M.
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Journal Title
BMC Genomics
Volume: 14
Pages: 248
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Mutations in the C-terminal domain of ColQ in endplate acetylcholinesterase deficiency compromise ColQ-MuSK interaction2013
Author(s)
Nakata T, Ito M, Azuma Y, Otsuka K, Noguchi Y, Komaki H, Okumura A, Shiraishi K, Masuda A, Natsume J, Kojima S, Ohno K.
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Journal Title
Hum Mutat
Volume: 34
Pages: 997-1004
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] A novel mutation in SCN4A causes severe myotonia and school-age-onset paralytic episodes2012
Author(s)
Yoshinaga H, Sakoda S, Good JM, Takahashi MP, Kubota T, Arikawa-Hirasawa E, Nakata T, Ohno K, Kitamura T, Kobayashi K, Ohtsuka Y.
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Journal Title
J Neurol Sci
Volume: 315
Pages: 15-19
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Four parameters increase the sensitivity and specificity of the exon array analysis and disclose twenty-five novel aberrantly spliced exons in myotonic dystrophy2012
Author(s)
Yamashita Y, Matsuura T, Shinmi J, Amakusa Y, Masuda A, Ito M, Kinoshita M, Furuya H, Abe K, Ibi T, Sahashi K, Ohno K.
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Journal Title
J Hum Genet
Volume: 57
Pages: 368-374
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Investigation of 11 Patients with GFPT1-Myasthenia Reveals Clinical, Structural, and Electrophysiologic Heterogeneity2013
Author(s)
Selcen D, Shen X-M, Milone M, Brengman J, Ohno K, McQuillen M, Deymeer F, Finkel R, Rowin J, Engel AG
Organizer
65th American Academy of Neurology (Platform)
Place of Presentation
San Diego, USA
Year and Date
20130321-20130321
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