2012 Fiscal Year Annual Research Report
白血病性幹細胞に対するキメラ抗原受容体を用いた遺伝子改変T細胞療法の開発
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24390260
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
小池 健一 信州大学, 医学部, 教授 (40143979)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂下 一夫 信州大学, 医学部附属病院, 助教 (10345746)
中沢 洋三 信州大学, 医学部, 助教 (60397312)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 白血病性幹細胞 / 免疫療法 / 小児白血病 / 骨髄異形成症候群 |
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| Research Abstract |
小児急性骨髄性白血病(AML)や若年性骨髄単球性白血病(JmmL)患者の予後を改善するため、再発の原因となる白血病性幹細胞に発現しているサイトカイン受容体(GM-CSF receptor, GM-CSFR)に着目し、GM-CSFRに結合して特異的な殺傷効果を示すキメラ抗原受容体(CAR)T細胞療法の開発を試みた。GM-CSFRに結合するGM-CSFのopen reading frameをトランスポゾンプラスミドにサブクローニングし、piggyBacトランスポゾン法を用いて正常同種T細胞へ遺伝子導入した(GMCSFR.CAR-T)。コントロールとして、非導入T細胞(Mock-T)を用いた。
GMCSFR.CAR-T細胞は、GM-CSFRを発現しているMO7e細胞に対して、E/T比=1:1で明らかな殺傷効果を発揮したが、GM-CSFRを発現していないK562白血病細胞の増殖には影響を及ぼさなかった。GMCSFR.CAR-T細胞とNRAS変異(codon 13 GGT>GAT)を有するJMML患者のCD34陽性細胞を1:1、1:4で混和し、SCF、TPO、IL-3存在下で、2日間および7日間培養し、コロニー数を算定した。GMCSFR.CAR-T細胞はE/T比が1:1だけでなく1:4でもJMML患者CD34陽性細胞から形成されるコロニー数を約10%に減少させたのに対して、Mock-T細胞では明らかなコロニー数の減少は認められなかった。GMCSFR.CAR-T細胞はPTPN11変異(227A>G)を有するJMML患者のCD34陽性細胞に対しても、NRAS変異を有するJmmL患者のCD34陽性細胞と同等の殺傷効果を示した。
GMCSFR.CAR-TはGM-CSFのopen reading frameから作製したため、SCF、TPO、GM-CSF刺激下においても殺傷効果を発揮するのかを検討した。その結果、SCF、TPO、IL-3刺激下と同等に、NRAS、PTPN11変異を持つJMML患者のCD34陽性細胞に対して抑制効果を示した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究実績の概要に記述したように、GM-CSF受容体に対して特異的に結合するキメラ抗原受容体(CAR)T細胞が作製できたこと、このGMCSFR.CAR-T細胞がJMML細胞に対して明らかな殺傷効果を示したための費用として使用する。
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| Strategy for Future Research Activity |
JMML患者に加え、AML患者由来の白血病細胞についてもGM-CSF-CAR-T細胞などCAR-T細胞のin vitro、in vivo殺傷効果を検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
当初計画で見込んだよりも安価に研究が完了したため、42,451円の次年度使用額が生じた。患者の白血病細胞に対するGM-CSF-CAR-T細胞の殺傷効果等を検討するための費用として使用する計画である。
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[Journal Article] Long-term haematological improvement after non-intensive or nochemotherapy in juvenile myelomonocytic leukaemia and poor correlation with adult myelodysplasia spliceosome-related mutations.2012
Author(s)
Matsuda K, Yoshida N, Miura S, Nakazawa Y, Sakashita K, Hyakuna N, Saito M, Kato F, Ogawa A, Watanabe A, Sotomatsu M, Kobayashi C, Ito T, Ishida F, Manabe A, Kojima S, Koike K,
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Journal Title
Br J Haematol
Volume: 157
Pages: 647-50
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Somatic mosaicism for oncogenic NRAS mutations in juvenilemyelomono cytic leukemia.2012
Author(s)
Doisaki S, Muramatsu H, Shimada A, Takahashi Y, Mori-Ezaki M, Sato M, Kawaguchi H, Kinoshita A, Sotomatsu M, Hayashi Y, Furukawa-Hibi Y, Yamada K, Hoshino H, Kiyoi H, Yoshida N, Sakaguchi H, Narita A, Wang X, Ismael O, Xu Y, Nishio N, Tanaka M, Hama A, Koike K, Kojima S.
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Journal Title
Blood
Volume: 120
Pages: 1485-8
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Genetic evaluation of childhood acute lymphoblastic leukemia in Iraqusing FTA cards.2012
Author(s)
Al-Kzayer LF, Sakashita K, Matsuda K, AI-Hadad SA, Al-Jadiry MF, Abed WM, Abdulkadhim JM, AI-Shujairi TA, Hasan JG, Al-Abdullah HM, Al-Ani MH, Saber PA, Inoshita T, Kamata M, Koike K.
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Journal Title
Pediatr Blood Cancer
Volume: 59
Pages: 461-7
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Food allergy after cord blood transplantation in children.2012
Author(s)
Sakashita K, Nakazawa Y, Yanagisawa R, Tanaka M, Saito S, Yoshikawa K, Hirabayashi K, Kusakari M, Kato S, Hidaka N, Nakayama Y, Shigemura T, Kobayashi N, Kobayashi M, Shiohara M, Koike K.
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Journal Title
Br J Haematol
Volume: 158
Pages: 672-6
DOI
Peer Reviewed
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