2013 Fiscal Year Annual Research Report
エピゲノム機構の異常が関与する遺伝性発達障害の発症病態の解明
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24390270
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| Research Institution | National Center of Neurology and Psychiatry |
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Principal Investigator |
伊藤 雅之 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所疾病研究第二部, 室長 (50243407)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | エピゲノム / 発達障害 / レット症候群 / モデル動物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究実施計画にもとづいて、以下の平成25年度の研究を遂行した。
(A) MeCP2の分子機構に基づくRTTの病態の解明と治療法の開発：Mecp2のMBDの変異の違いが表現型を変える機序の解明のために、MBDの変異導入細胞からRNAを抽出し、前年度と同様に同様に発現解析を行った。これらの結果から、ゲノムワイドに軽症化に関与する候補分子をもとめた結果、二つの候補分子を同定することができた。 今後、時間、空間的な発現分布や回復実験を行なう。
(B) 変異MECP2を導入したL929細胞（モデル細胞）へのHDAC阻害剤の投与実験：モデル細胞へHDAC阻害剤（Valproic acid）を投与し、IGFBP3の発現量を定量PCR、ウエスタンブロットで評価し、治療効果を比較検討した。その結果、モデル細胞と野生型L929細胞の発現に有意な違いが見いだせなかった。in vitroでの効果はないものと考えられたが、今後同様のHDAC阻害剤効果をin vivoレベルで調べる。
(C) MeCP2遺伝子の発現とRTT発症ならびに回復治療の臨界期に関する研究：ROSA26法による Mecp2遺伝子改変マウスを確立した。ROSA26ゲノム領域にテトラサイクリンのMecp2遺伝子発現コントロールシステム導入したノックインベクターを構築し、マウスを作成した。しかし、このマウスの交配を進めることが困難なため、今後凍結胚細胞を作成し再生することで、個体確保に努める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究計画どおりに概ね進めることができている。しかし、Mecp2遺伝子発現コントロールマウスの作出が幾分遅れている。これは、Mecp2遺伝子改変マウスとCre発現マウスとの交配が進めず、発現制御マウスが作成できなかったことによる。そのため、やむを得ず体外受精を行ったが、十分な個体の確保ができず、次に作成予定であったMecp2欠損マウスとの交配ができなかった。結果として、Mecp2遺伝子発現コントロールマウスの解析ができなかった。この原因は不明であるが、今後ヘテロマウスによる凍結胚作成により、個体確保に努め、テトラサイクリンによる症状発現と治療可能時期の同定に努める。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究の方向性は、当初研究計画どおりである。MeCP2の分子病態から治療候補分子を同定すること、培養細胞を用いた治療薬スクリーニング、Mecp2遺伝子発現コントロールマウスによる治療臨界期の解明である。これらMeCP2分子を中心とした病態解析をすすめ、治療法開発のための基盤を作り上げていく。しかし、後者については研究の遅れが予想される。
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| Causes of Carryover |
Mecp2遺伝子改変マウスとCre発現マウスとの交配が進めず、発現制御マウスが作成できなかったため、やむを得ず体外受精を行い、個体確保を図ったが、年度内に十分な個体の確保ができず、次に作成予定であったMecp2欠損マウスとの交配ができなかった。このため、実験動物とその飼育にかかる費用を次年度に持ち越した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度では、上記対策のもとに個体確保を行い、実験遂行をはかる。
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[Journal Article] Comparison of genomic and epigenomic expression in monozygotic twins discordant for Rett syndrome.2013
Author(s)
Miyake K, Yang C, Minakuchi Y, Ohori K, Soutome M, Endoh K, Hirasawa T, Kazuki Y, Adachi N, Suzuki S, Itoh M, Goto Y, Andoh T, Kurosawa H, Oshimura M, Sasaki M, Toyoda A, Kubota T.
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Journal Title
PLoS ONE
Volume: 8
Pages: 66729
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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