2013 Fiscal Year Annual Research Report

新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤による胆管癌・膵癌治療法の開発

Research Project

Project/Area Number	24390313
Research Institution	Nagoya University
Principal Investigator	梛野正人名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20237564)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	江畑智希名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60362258) 横山幸浩名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80378091) 國料俊男名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (60378023) 千賀威名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (80419431)
Project Period (FY)	2012-04-01 – 2017-03-31
Keywords	胆管癌 / 膵癌 / セリンスレオニンキナーゼ
Research Abstract	相互マシンラーニング法にて選択した150種類の候補化合物よりセリンスレオニンキナーゼ活性の抑制効果を持つ新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を選択した。新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の投与濃度を変更し膵癌細胞株KLM1、KP4、Panc1、正常膵細胞由来細胞株RI515に投与し、MTTアッセイによる増殖能とトリパンブルー色素排出試験による細胞死誘導能、ボイディンチャンバー法による浸潤能について検討した。新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤は正常膵細胞由来細胞株RI515と比較して膵癌細胞株KLM1、KP4、Panc1において有意な増殖抑制と細胞死誘導を示した。また浸潤能についても抑制効果を認めた。また正常膵細胞由来細胞株RI515より低濃度での膵癌細胞株KLM1、KP4、Panc1の増殖抑制が可能であった。膵癌細胞株KLM1によるマウス皮下発癌モデルに投与量を変更し新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を経口にて週1回で3週連続投与し、その抗腫瘍効果を検討した。新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤投与群において腫瘍の増殖抑制効果を認めたが、高濃度投与群においては死亡例を認めた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 皮下発癌モデルでの投与量の変更による新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の有効性の検討はできた。しかし膵癌の肝転移モデルの作成ができず、肝転移に対する新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の効果検討が不十分である。siRNAライブラリーでのsiRNAの導入に用いていた導入装置の修理によりsiRNAライブラリーを用いた癌細胞の増殖能、浸潤能に関する研究が遅延している。また新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の誘導体の作成がまだできていないことよりやや遅れている。
Strategy for Future Research Activity	1.新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の基礎的研究として平成26年度の研究を継続する。胆管癌、膵癌細胞株へ新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を投与後の網羅的遺伝子解析データを用いてパスウェイ解析を行なう。また同定したシグナル関連遺伝子を標的にしたshRNAを作成し、恒常的にシグナル関連遺伝子を抑制したドミナントネガティブ細胞株を作成し、その機能をさらに検討する。 2.新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の基礎的研究平成26年度の研究を継続する。新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤と細胞周期の機能解析をすすめるために細胞周期の進行をリアルタイムで観察可能な蛍光プローブであるFucci (Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator)を導入したヒト胆管癌細胞株、膵癌細胞株を作成する。Fucci導入細胞株に新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を投与し、細胞周期への効果について蛍光顕微鏡にて検討する。また胆管癌、膵癌症例の手術標本を用いてシグナル関連遺伝子の発現をウェスタンブロッティング法、リアルタイムPCR法にて検討する。 3.担癌動物実験モデルを用いた新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の機能解析を継続する。ヒト胆管癌、膵癌の皮下発癌モデルでの投与量などを変更し、その有効性を明らかにする。腹膜播種、肝転移モデルに新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を投与し、その効果を明らかにする。 4. 新規セリンスレオニンキナーゼ阻害剤の誘導体を数種類作成する。これら誘導体をヒト胆管癌細胞株、膵癌細胞株に投与し増殖能、アポトーシス誘導能、運動能、浸潤能、足場非依存性増殖により抗腫瘍効果を明らかにする。