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2012 Fiscal Year Research-status Report

血中循環がん細胞の検出を目指した細胞チップデバイスの開発

Research Project

Project/Area Number 24510173
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionNational Institute of Advanced Industrial Science and Technology

Principal Investigator

山村 昌平  独立行政法人産業技術総合研究所, 健康工学研究部門, 主任研究員 (50432141)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywords細胞チップ / マイクロアレイ / 循環がん細胞 / 転移性がん / 単一細胞解析 / バイオチップ / ハイスループットスクリーニング
Research Abstract

微細加工技術であるナノリソグラフィー技術(LIGAプロセス)を用いて、直径105マイクロメートルのマイクロアレイチップを作製した。マイクロチャンバーの直径、深さなどのデザインや、チップの表面処理として酸素プラズマ処理条件を検討することによって、白血球を均一かつ単一層に配置することに成功した。これらの条件をもとに、展開する細胞濃度を調整することによって、1つのマイクロチャンバーの穴底のみに約90個の白血球を配置することができ、1枚のチップで約180万個の白血球を単一層に配置することが可能となった。さらに、白血球中に培養系肺がん細胞(H1650株)を添加した試料をチップ上に展開した後、蛍光標識抗体等を用いて染色することによって、1枚のチップで100万個に1個(0.0001%)の標的がん細胞を検出することにも成功した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

今年度は、目標としていた高集積型の細胞チップを設計作製し、1枚のチップ上で約180万個の白血球を均一かつ単一層に配置することに成功した。それに加えて、培養系白血球細胞および全血試料に添加した培養系肺がん細胞(H1650株)の検出することができた。また、検出感度しては、1枚のチップで100万個に1個(0.0001%)以下の標的がん細胞を検出することが可能であった。

Strategy for Future Research Activity

まず、作製した細胞チップ上で、白血球中に混在する極少数のがん細胞を対象に、複数の蛍光標識抗体等を用いて、がん細胞のみを正確に検出できるように抗体や色素の種類や濃度の条件検討を行う。以上の条件を踏まえて、マイクロアレイスキャナーで高感度に検出できる条件を調べる。次に、添加するがん細胞の細胞濃度を変化させ、がん細胞濃度に依存して定量的に検出するための条件の洗い出しを行う。それと同時に、抗体多重染色をチップ上で行い、がん種の同定ができるように複数の抗体による染色を試み、より正確な解析ができるシステムを目指す。さらに、標的がん細胞の回収やチップ上でそのままPCRを行うことを検討し、標的の単一がん細胞の機能解析を行うことを試みる。それによって、正確性の高い循環がん細胞の解析、診断システムの構築を目指す。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

今後、複数の蛍光標識抗体等を用いて抗体多重染色の条件を検討するため、各種蛍光標識抗体や蛍光フィルターの購入を検討している。使用しているマイクロアレイスキャナーが2種類のレーザーしか搭載していないことから、抗体多重染色を行う場合、同時に蛍光顕微鏡も使用する必要があるため、各種レーザーや色素に合わせた蛍光フィルターを購入する予定である。また、研究遂行期間を通して、実験計画遂行上、複数の培養細胞(白血球細胞、各種がん細胞等)を培養することから、年間100万円程度の細胞培養用消耗品(プラスチックプレート、ピペット、培養用ガスボンベ等)が最低必要である。また、年数回、研究成果を社会に発信するために種々の必要経費(論文別刷、学会発表)を計上している。

  • Research Products

    (14 results)

All 2013 2012

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (6 results) (of which Invited: 1 results) Book (3 results) Patent(Industrial Property Rights) (3 results)

  • [Journal Article] Detection of miRNA in cell cultures by using microchip electrophoresis with fluorescence-labeled riboprobe2012

    • Author(s)
      Yamamura S., Yatsushiro S., Yamaguchi Y., Abe K., Shinohara Y., Kataoka M.
    • Journal Title

      Sensors

      Volume: 12 Pages: 7576-7586

    • DOI

      10.3390/s120607576

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Accurate detection of carcinoma cells by use of a cell microarray chip2012

    • Author(s)
      Yamamura S., Yatsushiro S., Yamaguchi Y., Abe K., Shinohara Y., Tamiya E., Baba Y.
    • Journal Title

      PloS One

      Volume: 7 Pages: e32370

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0032370

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 細胞チップを用いた血中循環がん細胞の検出技術の開発2013

    • Author(s)
      山村昌平、八代聖基、阿部佳織、May MawThet、馬場嘉信、片岡正俊
    • Organizer
      日本化学会第93春季年会
    • Place of Presentation
      立命館大学(滋賀)
    • Year and Date
      20130322-20130325
  • [Presentation] 血中循環がん細胞の検出を目指した細胞チップの開発2013

    • Author(s)
      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Organizer
      産総研本格研究ワークショップ(四国)
    • Place of Presentation
      サンメッセ香川(香川)
    • Year and Date
      20130129-20130129
  • [Presentation] ラスチック製マイクロチップ基板での血中アディポカイン測定と糖尿病診断への応用2013

    • Author(s)
      片岡正俊、阿部佳織、山村昌平、八代聖基
    • Organizer
      第25回バイオエンジニアリング講演会
    • Place of Presentation
      産総研つくば(茨城)
    • Year and Date
      20130110-20130110
    • Invited
  • [Presentation] Cell microarray chip for accurate detection of circulating tumor cells2012

    • Author(s)
      Shohei Yamamura, Shouki Yatsushiro, Kaori Abe, May MawThet, Yoshinobu Baba, Masatoshi Kataoka,
    • Organizer
      International Joint Symposium on Single-Cell Analysis (SCS 2012)
    • Place of Presentation
      Kyoto, JAPAN
    • Year and Date
      20121127-20121128
  • [Presentation] 血中循環がん細胞の検出を目指した細胞チップの開発2012

    • Author(s)
      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Organizer
      産総研オープンラボ2012
    • Place of Presentation
      産総研つくば(茨城)
    • Year and Date
      20121025-20121026
  • [Presentation] 血中循環がん細胞の検出を目指した細胞チップの開発2012

    • Author(s)
      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Organizer
      徳島ビジネスチャレンジメッセ2012
    • Place of Presentation
      アスティーとくしま(徳島)
    • Year and Date
      20121011-20121013
  • [Book] 「Chemical Sensors」化学センサ、細胞チップを用いた新規診断技術の開発2012

    • Author(s)
      山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Total Pages
      6
    • Publisher
      電気化学会・化学センサ研究会
  • [Book] タンパク質分析、マイクロチップを用いたバイオマーカー解析2012

    • Author(s)
      片岡正俊、八代聖基、山村昌平
    • Total Pages
      3
    • Publisher
      丸善出版
  • [Book] 産総研TODAY、がんの早期診断法を開発2012

    • Author(s)
      山村昌平
    • Total Pages
      2
    • Publisher
      産業技術総合研究所
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 細胞展開用マイクロチャンバーチップ2012

    • Inventor(s)
      星久美子、荒木淳吾、山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Industrial Property Rights Holder
      コニカミノルタ、産総研
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2012-149407
    • Filing Date
      2012-07-03
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 細胞展開用マイクロチャンバーチップの製造方法2012

    • Inventor(s)
      星久美子、荒木淳吾、山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Industrial Property Rights Holder
      コニカミノルタ、産総研
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2012-149406
    • Filing Date
      2012-07-03
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 細胞展開用デバイスおよび希少細胞の検出方法2012

    • Inventor(s)
      荒木淳吾、星久美子、山村昌平、八代聖基、片岡正俊
    • Industrial Property Rights Holder
      コニカミノルタ、産総研
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2012-149405
    • Filing Date
      2012-07-03

URL: 

Published: 2014-07-24  

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