2014 Fiscal Year Annual Research Report
アクリル酸生産関連遺伝子の分子機能解析とアクリル酸生産バイオプロセスへの展開
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24580110
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| Research Institution | Kyoto Institute of Technology |
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Principal Investigator |
麻生 祐司 京都工芸繊維大学, 工芸科学研究科, 准教授 (70380590)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | アクリル酸 / 代謝工学 / 発酵工学 / バイオベースマテリアル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
アクリル酸生産株Megasphaera elsdenii JCM1772由来アクリル酸生産関連遺伝子（pctプロピオン酸-CoA転移酵素遺伝子）およびlcdCAB（ラクチル-CoA脱水酵素遺伝子））を発現ベクターpETDuet-1に黒ニングしpETDuet-pct-lcdCABを得た。これを用いて大腸菌E. coli JW0885を形質転換した。SDS-PAGEにより、得られた形質転換体にてPctおよびLcdCABの発現を確認した。得られた形質転換体を用いて、パントテン酸添加M9培地にて嫌気条件下で18h培養した。経時的に培養液上清をサンプリングしアクリル酸量、乳酸量、培養液濁度、残存グルコース濃度をHPLCおよび市販キットを用いて測定した。その結果、18h時間培養後のアクリル酸量は0.17mMであった。次に、GC-MSを用いて培養液上清を分析したところ、アクリル酸と一致するピークを得たことから、形質転換体はアクリル酸を生産していることを確認した。同様の実験をLactococcus lactisを用いて行った。具体的には、Lactobacillus delbrueckii由来のD-乳酸脱水素酵素遺伝子D-ldhをL. lactis NZ9000株のL-ldhと置き換え、D-乳酸生産NZ9000株を作成した。これにpctおよびlcdCABをNICE systemを用いて導入し発現させた。しかし、明瞭なアクリル酸の生産は確認できなかった。その理由として、PctおよびLcdCABの発現量が十分でないことが考えられた。
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Research Products
(13 results)
