2014 Fiscal Year Annual Research Report
植物抗原性糖鎖ポリマーによる自然免疫を介したＴｈ２分化抑制の解析
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24580494
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
前田 恵 岡山大学, 環境生命科学研究科, 助教 (20434988)
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2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | N-グリカン / 植物抗原性糖鎖 / Cry j1 / Asn-糖鎖 / 糖鎖ポリマー / γポリグルタミン酸 / 樹状細胞 / サイトカイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
スギ花粉症の原因物質であるスギ花粉アレルゲンCry j1は糖タンパク質でありコア構造にMan3Xyl1Fuc1を有する植物抗原性糖鎖が結合している。植物抗原性糖鎖の骨格構造Man3Fuc1Xyl1はCry j1特異的なTh2細胞増殖とTh2細胞からのIL-4産生を有意に抑制するため，花粉症の新規治療薬として応用利用が期待されている。しかしながら植物抗原性糖鎖の免疫活性は非常に弱く，この糖鎖を多価に結合した糖鎖ポリマーの作製が必要と考えられた。また，T細胞の活性化とTh1/Th2分化には，ヘルパーT細胞のT細胞受容体が抗原提示細胞の提示したMHCⅡ-抗原ペプチド複合体と結合し，続いてヘルパーT細胞上の補助受容体CD28が抗原提示細胞上の補助刺激分子CD80/CD86と結合し刺激される必要がある。そこで本年度は，（1）γPGAを用いた糖鎖ポリマー作製と（2）糖鎖ポリマーによる樹状細胞分化制御について実験を行った。（1）については，ポリマーの骨格として，納豆菌由来DL体γPGA（平均分子量20万～50万，wako社製）を使用し，γPGAのカルボキシ基にAsn-糖鎖のアミノ基をペプチド縮合剤（BOP，HOBt）により結合させた。ゲルろ過，逆相HPLCにより糖鎖ポリマーは精製し，アミノ酸の組成分析により糖鎖結合率を算出した。その結果，グルタミン酸（Glu）10残基につき1残基の糖鎖修飾を確認できた。（2）については，末梢血由来CD14陽性単球を回収し，IL-4とGM-CSFの存在化，6日間培養することにより未分化樹状細胞を誘導した。糖鎖ポリマーありはγPGAにより未分化樹状細胞を刺激し，2日間培養後，樹状細胞の分化マーカーであるCD80/CD86についてフローサイトメーターで解析した。その結果，糖鎖ポリマーはγPGAによる樹状細胞分化を有意に抑制しており，Th2応答の抑制に関わることが示唆された。一方で，今年度は，ローヤルゼリーの糖タンパク質に結合したTF抗原含有N-グリカンの多量精製にも成功し論文発表した。
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