2013 Fiscal Year Research-status Report
Ｍｎｋプロテインキナーゼによる翻訳調節を介した細胞増殖制御機構の解明
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24590105
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| Research Institution | Osaka University of Pharmaceutical Sciences |
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Principal Investigator |
福永 理己郎 大阪薬科大学, 薬学部, 教授 (40189965)
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| Keywords | 翻訳制御 / プロテインキナーゼ / MAPキナーゼ / シグナル伝達 / リン酸化 / 翻訳開始 |
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| Research Abstract |
平成25年度の研究計画に基づいて，以下の研究を実施した。まず，Mnk1変異体を発現させたMnk-DKO MEF細胞を増殖因子やストレスで刺激した際のmTORシグナル系およびMnkシグナル系について，eIF4G(Ser1108残基)のリン酸化やeIF4E(Ser209)のリン酸化を検出するリン酸化特異抗体を用いて解析した。その結果、Mnk1を強制発現させたMnK-DKO細胞を血清で刺激すると，Mnk1-Ser209のリン酸化に伴ってeIF4G-Ser1108のリン酸化レベルが急速に低下する現象を見出した。しかしこれは，プロテインSet/Thrホスファターゼの活性化ではなく，Mnk1あるいは下流のプロテインキナーゼによってSer1105あるいはSer1106残基がリン酸化されることで抗pSer1108抗体による認識が阻害された結果である可能性が示唆された。
一方，ヒトSprouty2 (Spry2)はDrosophila Spryのホモログであり，増殖因子受容体チロシンキナーゼ情報伝達系の負の制御分子として重要な機能を担っている。最近，Spry2の機能がMnk1/2によって制御されることが報告されたことから，Mnk1/2が直接にSpry2をリン酸化する可能性について検討した。HA-Spry2発現ベクターをMnk1と共にHEK293T細胞に導入し，HA-Spry2のSDS-PAGE上における移動度シフトによってリン酸化解析を行なった結果，Mnk1の活性化に伴って細胞内でSpry2がリン酸化される事が示唆された。Spry2のリン酸化部位と予想されるSer112およびSer121のAla変異Spry2ではリン酸化レベルの低下が認められたが，変異Spry2でもシフトバンドが残存することから，S112/S212以外にもMnk1のリン酸化部位が存在することが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
『研究実績の概要』で記したように，当初の計画はおおむね順調に進展した。しかし，S112/S212以外にもMnk1のリン酸化部位が存在することが示唆され，他のリン酸化部位の探索を進める必要が出てきたため，以降の解析についてはH25年度中に進めることが出来なかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
『研究実績の概要』で記した成果を踏まえ，それらを更に発展させた研究をH26年度の計画に沿って以下の２点を中心に実施していく予定である。(1) eIF4GのSer1105あるいはSer1106残基のリン酸化によってリン酸化Ser1108抗体による認識が阻害されている可能性について，Ser1105/1106がMnk1あるいは他のプロテインキナーゼによってリン酸化される可能性について解析を進める。(2) Spry2のS112/S212以外のリン酸化部位の同定を行なうと共に，Mnk1によるSpry2リン酸化の生理的意義についての検討を進める。
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[Journal Article] Interplay between chromatin-modifying enzymes controls colon cancer progression through Wnt signaling2014
Author(s)
Chevillard-Briet M, Quaranta M, Grezy A, Mattera L, Courilleau C, Philippe M, Mercier P, Corpet D, Lough J, Ueda T, Fukunaga R, Trouche D, Escaffit F
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Journal Title
Hum. Mol. Genet.
Volume: 23
Pages: 2120-2131
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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