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2013 Fiscal Year Research-status Report

ジヒドロビオプテリンによる内皮機能障害機序の解明と病態生理学的意義の評価

Research Project

Project/Area Number 24590324
Research InstitutionUniversity of the Ryukyus

Principal Investigator

野口 克彦  琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70156181)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 筒井 正人  琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70309962)
Keywordsテトラヒドロビオプテリン / ジヒドロビオプテリン / dihydrofolate reductase / 一酸化窒素合成酵素
Research Abstract

細胞内ジヒドロビオプテリン(BH2)増加の長期的な影響を調べる実験を行った。
1. マウスでのメトトレキサートとsepiapterinの長期間投与方法・投与量の検討を行い、浸透圧ミニポンプの使用により、組織中ジヒドロビオプテリン(BH2)増加が得られた。また、partial carotid ligationモデルの作成を行い、2週間の頸動脈部分結紮で5匹中4匹で動脈硬化病変を確認できた。しかし、組織中BH2増加による頸動脈動脈硬化病変の増強はみられなかった。その原因のひとつとして、高用量のメトトレキサートによる長期的な影響が考えられた。
2. そこで、細胞内でBH2からテトラヒドロビオプテリン(BH4)への変換を行うdihydrofolate reductase (DHFR)のコンディショナルノックアウトマウス(Dhfr(loxP))の作成を開始した。理研より納入されたDHFR遺伝子フロックスキメラマウスとC57BL/6との交配で得られたF1マウスのDNA genotypingを行ったところ、PCRにて改変遺伝子のgermline transmissionを確認することができた。さらにサザン解析で、2種類のES細胞(#19と#33)由来のマウスで予定通りの遺伝子改変が起こっていることを確認した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

当該年度では、Dhfr(loxP)のヘテロ接合体マウス同士の交配により、ホモ接合体マウスを作製してきた。しかし、#19のES細胞ライン由来のマウスは繁殖率が低く、#33のマウスに比べおよそ1世代分交配が遅れている。また、#33のマウスでもホモ接合体の出現率が理論的な予想値よりかなり低く(55匹中2匹)、当初の予定より進行が遅れている。

Strategy for Future Research Activity

次年度では、可能な限り交配数を増加させ、低出生率を補う予定である。さらに改変遺伝子に含まれているネオマシンカセットが出生率に悪影響を及ぼしている可能性があるため、FLPマウスと交配することによりネオマイシンカセットを除去したマウスを作製する予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

当初見込んでいた消耗品が安価に購入できたため。
物品購入に充てる。

  • Research Products

    (5 results)

All 2013 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Dihydrobiopterinによる内皮型一酸化窒素合成酵素機能障害2013

    • Author(s)
      野口 克彦、濱舘 直史、松﨑 俊博、坂梨 まゆ子、仲宗根 淳子、内田 太郎、新垣 久美子、久保田 陽秋、石内 勝吾、益崎 裕章、須加原 一博、大屋 祐輔、坂梨 又郎、筒井 正人
    • Journal Title

      琉球医学会誌

      Volume: 32 Pages: 7-12

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Long-term treatment with san'o-shashin-to, a kampo medicine, markedly ameliorates cardiac ischemia-reperfusion injury in ovariectomized rats via the redox-dependent mechanism.2013

    • Author(s)
      Sakanashi M, Matsuzaki T, Noguchi K, Nakasone J, Sakanashi M, Uchida T, Kina-Tanada M, Kubota H, Arakaki K, Tanimoto A, Yanagihara N, Sakanashi M, Ohya Y, Masuzaki H, Ishiuchi S, Sugahara K, Tsutsui M
    • Journal Title

      Circ J

      Volume: 77 Pages: 1827-1837

    • DOI

      10.1253/circj.CJ-12-1434

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ジヒドロビオプテリンによる生体位ラットのeNOS機能障害

    • Author(s)
      野口克彦、松崎俊博、坂梨まゆ子、浜館直史、仲宗根淳子、坂梨又郎、筒井正人
    • Organizer
      第13回日本NO学会
    • Place of Presentation
      那覇市
  • [Presentation] コーヒー1杯のカフェインのヒト微小血管内皮機能に対する急性効果

    • Author(s)
      野口克彦、松崎俊博、坂梨まゆ子、浜館直史、仲宗根淳子、坂梨又郎、筒井正人
    • Organizer
      第13回日本NO学会
    • Place of Presentation
      那覇市
  • [Remarks] 琉球大学大学院医学研究科薬理学

    • URL

      http://w3.u-ryukyu.ac.jp/pharmaco/Pharmacology/youkoso_yao_lihe.html

URL: 

Published: 2015-05-28  

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