2015 Fiscal Year Annual Research Report
ＲＮＡスプライシングによる酸化ストレスシグナル制御の分子機構の解析
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24590464
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
竹腰 進 東海大学, 医学部, 教授 (70216878)
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2012-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | protein kinase c / RNA splicing / oxidative stress / diacylglycerol |
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| Outline of Annual Research Achievements |
PKCδSV mRNAの測定系を確立し、四塩化炭素短期投与および脳虚血再潅流により酸化ストレスを負荷したモデル動物の臓器(肝臓および脳)においてPKCδSVが増加することを明らかにした。スーパーオキサイドを発生させる薬剤であるmenadioneにより酸化ストレスを負荷したPC12細胞におけるPKCδSVの細胞傷害抑制作用を示した。更にPKCδSVタンパク質の発現解析系を確立すべく、PKCδSVに特異的なアミノ酸配列をもつペプチドを用いて特異抗体の作成を試みた。PKCδ遺伝子からAlternative splicingにより産生されるPKCδSVは、PKCδのwild typeとは異なるアミノ酸配列を有する。このPKCδSV特異的アミノ酸配列部の中から遺伝子データベースを参考に他の分子との相同性を持たない2つの配列を選択し、ペプチドを合成した。このペプチドにKLHをコンジュゲーションしたものを用いてウサギに免役し抗体作成を行った。作成した抗体とPKCδのC末側およびN末側を認識する市販を用いて、酸化ストレスモデル動物組織（四塩化炭素投与マウス肝臓、虚血再灌流ラット脳）を用いて蛋白質の発現解析を施行した。その結果、自作したPKCδSV特異的抗体がPKCδSVを認識すること、また、酸化ストレス負荷によりPKCδSV蛋白質の発現が増加することが明らかとなった。ラジカル発生剤であるAAPHおよびAMVNにより酸化ストレスを負荷したところPC12細胞の生存率は減少したが、PKCδSVを高発現したPC12細胞ではこれらのラジカル発生剤による細胞傷害が顕著に抑制されていた。
これらの結果から、酸化ストレスによって誘導されるPKCのスプライシングバリアントであるPKCδSVは酸化ストレス制御分子であることが判明した。また、生体中にはRNAスプライシングを制御することにより酸化ストレス傷害を防御する機構が存在することが示された。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] A method for estimating spatial resolution of real image in the Fourier domain.2015
Author(s)
Mizutani R, Saiga R, Takekoshi S, Inomoto C, Nakamura N, Itokawa M, Arai M, Oshima K, Takeuchi A, Uesugi K, Terada Y, Suzuki Y.
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Journal Title
J Microsc
Volume: 261
Pages: 57-66
DOI
Peer Reviewed
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