2014 Fiscal Year Annual Research Report
新たなＴａｑ酵素を用いた迅速な感染症起因菌同定ＩＴシステムの臨床応用
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24590682
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| Research Institution | University of Toyama |
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Principal Investigator |
仁井見 英樹 富山大学, 大学病院, 助教 (50401865)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北島 勲 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (50214797)
野手 良剛 富山大学, 大学病院, 臨床検査技師長 (60377364)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 遺伝子検査 / 敗血症 / 微生物 / 感染症 / 遺伝子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成２６年度は、システム全体の評価、試薬のキット化、そして多施設での実施と結果のフィードバックを行った。
１，システム全体の評価：本年度は先ずシステムの学内試験運用を実施し、２００検体以上の実施を行い、システムの正確性、従来法(培養法）との比較、迅速性、簡便性、そして経済性を比較検討し、その優位性と安全性を全体評価した。以上は論文化を行い、現在、Scientific Reportsにてリバイス中である。
２，試薬のキット化：先ずプロトコールを標準化を行い、次に安定した結果を得るために試薬のキット化を行った。特に本研究システムでは微量のバクテリアを高感度にPCR検出するため、試薬の全てにバクテリアDNAのコンタミが無いことが重要な条件となる。具体的には、独自開発したeukaryote-made Taq polymerase, Primer set, Eva green, Reagents, distilled Water, Tubes等、全てがバクテリアDNA contamination freeを保証したキットとし、三井化学株式会社と共同でキット化を行った。
３，多施設での実施と結果のフィードバック：多施設での実施において、上記のキットを用いることで試薬とプロトコールを標準化することが出来、また、webを介して起炎菌同定ソフトウェアを共用することで、施設間（and 測定機器）での差が無く安定した同定結果を得ることが期待出来る。実施条件としては、Tm値解析において、サンプル間誤差の最も少ない（±0.05℃）RotorGeneQ (QIAGEN)あるいはLightCycler nano (Roche)を用いてHRM解析を行うことを必須とする。本年度は実際に長崎大学、京都府立医科大学、京都医療センター、山梨大学、そして埼玉県小児医療センターとの多施設実施を行った。そして、多施設間で行った２６０検体の結果を併せ、同定結果をフィードバックすることで、プロトコールの更なる最適化を行った。
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