骨髄由来ＥＰＣの深部静脈血栓塞栓症への関与の解明と新しい血栓陳旧度判定法の確立

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24590863
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 野坂 みずほ 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (00244731)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 石田 裕子 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (10364077) ; 木村 章彦 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (60136611) ; 近藤 稔和 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (70251923)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 深部静脈血栓塞栓症 / 血管内皮前駆細胞 / サイトカイン / MMP / プラスミノーゲン活性因子

Outline of Annual Research Achievements

マウスを用いて下大静脈結紮による深部静脈血栓症（DVT）モデルを作成して，血栓内の骨髄由来線維細胞（fibrocyte），血管内皮前駆細胞（EPC）の，血栓陳旧度にともなう動態を明らかにするとともに，血栓形成・溶解に関わっていると考えられるサイトカイン，ケモカイン，およびその受容体の役割について検討した．すでに野生型マウスの血栓ではfibrocyteは血栓陳旧度にともなって変化し，下大静脈結紮後14日後に最も増加することが分かっている．さらに血栓中のEPCは結紮から10日後に最も多く観察され，その数の変化により，血栓陳旧度を評価できることが明らかになった．
また血栓中のサイトカインやケモカインを解析することにより，その予防・治療法開発に重要な結果を得られる可能性があることが示唆されていたのだが，特に今年度は，野生型マウスに比較してCCR5ノックアウトマウスで，血栓の溶解が遅延する結果を得た．CCR5ノックアウトマウスの血栓中には，野生型に比較して，Plat（tPA）とPlau（uPA）遺伝子の発現量が低下していることが分かった．そこでCCR5のリガンドである，CCL3，CCL4，CCL5それぞれの血栓形成・溶解過程における動態や役割の解明を試みた．その結果，野生型マウスの血栓において，血栓陳旧度にともない，CCL3およびCCL5が増加する傾向が認められた．また蛍光二重染色の結果，血栓中のマクロファージがCCL3やCCL5を産生していることが分かった．さらに，野生型マウスの腹腔内マクロファージをマウスリコンビナントCCL3やCCL5で刺激して，プラスミノーゲン活性化因子の遺伝子発現を，リアルタイムRT-PCRで検索したところ，CCL3によってPlat（tPA）が，CCL5によってPlau（uPA）遺伝子発現が増加することが分かった．

Research Products

• [Journal Article] Immunohistochemical detection of intrathrombotic IL-6 and its application to thrombus age estimation (2015)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Hama M, Kawaguchi T, Yamamoto H, Kuninaka Y, Shimada E, Kondo T
  • Journal Title: Int J Legal Med Volume: - Pages: -
  • DOI: DOI 10.1007/s00414-015-1147-9
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Autophagy in skin wounds: a novel marker for vital reactions (2015)
  • Author(s): Kimura A, Ishida Y, Nosaka M, Shiraki M, Hama M, Kawaguchi T, Kuninaka Y, Shimada E, Yamamoto H, Takayasu T, Kondo T.
  • Journal Title: Int J Legal Med Volume: - Pages: -
  • DOI: DOI 10.1007/s00414-015-1168-4
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Immunohistochemical analysis on MMP-2 and MMP-9 for wound age determination (2015)
  • Author(s): Ishida Y, Kuninaka Y, Nosaka M, Kimura A, Kawaguchi T, Hama M, Sakamoto S, Shinozaki K, Eisenmenger W, Kondo T.
  • Journal Title: Int J Legal Med Volume: - Pages: -
  • DOI: DOI 10.1007/s00414-015-1167-5
  • Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Absence of CCR5 accelerates thrombus formation through reduced VEGF, tPA and uPA expression in mice (2014)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Kuninaka Y, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都市）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] Luck of IL-6 exaggerates angiotensin II-induced aortic aneurysm and dissection in BALB/c mice (2014)
  • Author(s): Shinozaki K, Kimura A, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Mukaida N, Kondo t
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都市）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] The absence of CCL3/MIP-1alpha exaggerated CaCl2-induced aortic aneurysm (2014)
  • Author(s): Ishida Y, Kuninaka Y, Nosaka M, Tanana T, Shinozaki K, Kimura A, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都市）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] マウス皮膚創傷治癒におけるオートファジーの役割解析 ―その 1― (2014)
  • Author(s): 石田裕子，田中智大，木村章彦，野坂みずほ，國中由美，川口真理子，近藤稔和
  • Organizer: 第44回日本創傷治癒学会
  • Place of Presentation: ホテルメトロポリタン仙台（仙台市）
  • Year and Date: 2014-12-02 – 2014-12-03
• [Presentation] 死後CT を用いた溺死判定の試み－第一報－ (2014)
  • Author(s): 川口敬士，濵 瑞貴，坂本翔一，西山幸祐，石田裕子，野坂みずほ， 國中由美，川口真理子，木村章彦，近藤稔和
  • Organizer: 第61回日本法医学会学術近畿地方集会
  • Place of Presentation: ノボテル甲子園（兵庫県西宮市）
  • Year and Date: 2014-11-08 – 2014-11-08
• [Presentation] 大動脈解離における IL-6 の病態生理学的役割 (2014)
  • Author(s): 篠﨑浩平，木村章彦，石田裕子，野坂みずほ，坂本翔一，西山幸佑，國中由美，島田 栄美，川口真理子，近藤稔和
  • Organizer: 第61回日本法医学会学術近畿地方集会
  • Place of Presentation: ノボテル甲子園（兵庫県西宮市）
  • Year and Date: 2014-11-08 – 2014-11-08
• [Presentation] Absence of IL-6 accelerates thrombus formation through reduced MMPs and uPA expression in murine deep vein thrombosis model (2014)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Kuninaka Y, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: Second Annual Meeting of the International Cytokine and Interon Society (ICIS)
  • Place of Presentation: Melbourne Convention & Exhibition Centre, Melbourne, Australia
  • Year and Date: 2014-10-26 – 2014-10-29
• [Presentation] Forensic pathophysiological study on IL-6 expression for age determination of intrathrombus thrombi (2014)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Kuninaka Y, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Biological clock in skin wounds (2014)
  • Author(s): Kimura A, Ishida Y, Shiraki M, Nosaka M, Kuninaka Y, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Detection of endothelial progenitor cells in human skin wounds and its application for wound age determination (2014)
  • Author(s): Kondo T, Ishida Y, Kimura A, Nosaka M, Kuninaka Y, Eisenmenger W
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Immunohistochemical analysis on cyclooxygenase-2 for wound age determination. (2014)
  • Author(s): Ishida Y, Kimura A, Nosaka M, Kuninaka Y, Takayasu T, Eisenmenger W, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Fatal injury by high pressure water jet init - A case report (2014)
  • Author(s): Iwahashi Y, Inaka S, Shinozaki K, Shiraki M, Shimada E, Kawaguchi M, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Kimura A, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] A case of sudden unexpected death due to sigmoid volvulus (2014)
  • Author(s): Nishiyama K, Sakamoto S, Iwahashi Y, Inaka S, Kawaguchi M, Shimada E, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Kimura A, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] A fatel case of hemoperitoneum after percutaneous radiofrequency ablation in a patient with hepatocellular carcinoma (2014)
  • Author(s): Inaka S, Iwahashi Y, Sakamoto S, Nishiyama K, Kawaguchi M, Shimada E, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Kimura A, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Lack of IL-6 exaggerates angiotensin II-induced aortic aneurysm and dissection in BALB/c mice (2014)
  • Author(s): Shinozaki K, Kimura A, Shiraki M, Kawagichi M, Shimada E, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Kondo t
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Determination of acephate and methamidophos in biological specimens by GC-MS in an autopsy case (2014)
  • Author(s): Takayasu T, Ishida Y, Nosaka M, Kawaguchi M, Kuninaka Y, Kimura A, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Foreinsic consideration of methamphetamine-related autopsy cases (2014)
  • Author(s): Sakamoto S, Nishiyama K, Shiraki M, Shinozaki K, Kawaguchi M, Shimada E, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Kimura A, Takayasu T, Kondo T
  • Organizer: 9th International Symposium Advances in Legal Medicine/第98次日本法医学会学術全国集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡市）
  • Year and Date: 2014-06-16 – 2014-06-20
• [Presentation] Absence of IL-6 accelerates thrombus formation through reduced MMPs and uPA expression in mice (2014)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Kuninaka Y, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: Interleukin 6; Biology-Pathophysiology-Therapy
  • Place of Presentation: Atlantic Hotel Kiel, Kiel, Germany
  • Year and Date: 2014-05-14 – 2014-05-17
• [Presentation] Estrogen exaggerates arsenic-induced renal injury through inhibition of IL-6/JAK/STAT3 signaling in female mice (2014)
  • Author(s): Kimura A, Nosaka M, Ishida Y, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: Interleukin 6; Biology-Pathophysiology-Therapy
  • Place of Presentation: Atlantic Hotel Kiel, Kiel, Germany
  • Year and Date: 2014-05-14 – 2014-05-17
• [Presentation] Opposite roles of IFN-γ and TNF-α in resolution of stasis-induced deep vein thrombosis (2014)
  • Author(s): Nosaka M, Ishida Y, Kimura A, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: The 18th International Vascular Biology Meeting Abstracts
  • Place of Presentation: みやこめっせ・京都市勧業館（京都市）
  • Year and Date: 2014-04-14 – 2014-04-17
• [Presentation] Lack of IFN-γ exaggerates ANG II-induced aortic aneurysm (2014)
  • Author(s): Kimura A, Ishida Y, Nosaka M, Kuninaka Y, Mukaida N, Kondo T
  • Organizer: The 18th International Vascular Biology Meeting Abstracts
  • Place of Presentation: みやこめっせ・京都市勧業館（京都市）
  • Year and Date: 2014-04-14 – 2014-04-17