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2012 Fiscal Year Research-status Report

オーバル細胞増殖を介した肝再生・修復における核内受容体CARの役割

Research Project

Project/Area Number 24590954
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionGunma University

Principal Investigator

山崎 勇一  群馬大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00582404)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 柿崎 暁  群馬大学, 医学部, 助教 (80344935)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2016-03-31
Keywords核内受容体CAR / オーバル細胞増殖 / 肝再生
Research Abstract

1.CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析
CARおよびPXRノックアウトマウスを用いて14、21日間のDDC添加食での解析を進めた。CARを活性化するためTCPOBOPを投与した野生マウスを加え、DDC添加食後マウス肝で病理組織標本を作製し、HE染色及び、EpCAM、CK19の免疫組織染色によりオーバル細胞増殖を確認した。CARおよびPXRノックアウトマウスを用いて14、21日間の0.165%エチオニン添加水コリン欠乏(CDE)食での解析を進めた。CDE食後マウス肝で、病理組織標本を作製し、HE染色及び、EpCAM、CK19の免疫組織染色によりオーバル細胞増殖を確認した。また、CDE食後のマウス肝でCARにより調節される遺伝子およびオーバル細胞増殖に特異的な遺伝子発現をレーザーマイクロダイセクション、リアルタイムPCRを用いて検討した。
2.フローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定
東京大学分子細胞生物学研究所、発生・再生研究分野、宮島研究室、伊藤 暢氏、大学院生2名の協力のもとフローサイトメトリー法によりCARノックアウトマウス、野生マウスからオーバル細胞の分離、同定を行った。CARを活性化するためTCPOBOPを投与したCARノックアウトマウス、野生マウスからもオーバル細胞の分離、同定を行い、RNAを抽出し、CARにより調節される遺伝子およびオーバル細胞増殖に特異的な遺伝子発現をリアルタイムPCRを用いて検討した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析およびフローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定ともにおおむね順調に進展している

Strategy for Future Research Activity

1.CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析
前年度の解析をさらに推進、TCPOBOPやAndrostanolによるCARの活性化あるいは抑制が与える、CDE食による遺伝子発現および蛋白発現レベルの変化、局在への影響を検討する。
2.初代培養オーバル細胞を用いたin vitroの実験系
フローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定による初代培養オーバル細胞の実験系を用いて遺伝子発現解析、TCPOBOP、PBなどのCAR activatorによるオーバル細胞増殖への影響を、CARにより調節されるCYP2B10、GADD45αなどのmRNAの測定やMTT、BrdU法などによる細胞増殖アッセイ、細胞遊走アッセイにより評価する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

1.CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析
前年度の解析をさらに推進、CDE食による遺伝子発現および蛋白発現レベルの変化、局在への影響をレーザーマイクロダイセクション、リアルタイムPCR、免疫組織染色などで検討する。
2.初代培養オーバル細胞を用いたin vitroの実験系
東京大学分子細胞生物学研究所、発生・再生研究分野、宮島研究室の協力を得て、フローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定による初代培養オーバル細胞の実験系を確立し、遺伝子発現解析により評価する。

  • Research Products

    (1 results)

All 2013

All Journal Article (1 results)

  • [Journal Article] DDCにより誘導される肝障害,肝前駆細胞,オーバル細胞増殖を介した肝再生,修復における核内受容体CARの役割2013

    • Author(s)
      山崎勇一、柿崎暁、森昌朋、根岸正彦
    • Journal Title

      消化器内科

      Volume: 56巻第3号 Pages: 301 310

URL: 

Published: 2014-07-24  

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