オーバル細胞増殖を介した肝再生・修復における核内受容体ＣＡＲの役割

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24590954
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 山崎 勇一 群馬大学, 医学部附属病院, 助教 (00582404)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柿崎 暁 群馬大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80344935)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 核内受容体CAR / 肝再生 / オーバル細胞増殖

Outline of Annual Research Achievements

1. CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析
CARおよびPXRノックアウトマウスを用いて14、21日間のDDC添加食での解析を進めた。CARを活性化するためTCPOBOPを投与した野生マウスを加え、DDC添加食後マウス肝で病理組織標本を作製し、HE染色及び、EpCAM、CK19の免疫組織染色によりオーバル細胞増殖を再確認した。CARおよびPXRノックアウトマウスを用いて14、21日間の0.165%エチオニン添加水コリン欠乏（CDE）食での解析を進めた。CDE食後マウス肝で、病理組織標本を作製し、HE染色及び、EpCAM、CK19の免疫組織染色によりオーバル細胞増殖を再確認した。また、CDE食後のマウス肝でCARにより調節される遺伝子およびオーバル細胞増殖に特異的な遺伝子発現をリアルタイムPCRを用いて再検討した
2. フローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定
フローサイトメトリー法によりCARノックアウトマウス、野生マウスからオーバル細胞の分離、同定を行った。CARを活性化するためTCPOBOPを投与したCARノックアウトマウス、野生マウスからもオーバル細胞の分離、同定を行った。RNAを抽出し、CARにより調節されるCYP2Bl0、GADD45α などの遺伝子発現、オーバル細胞増殖に特異的なEpCAM、CK19などの遺伝子発現、肝再生に関連する遺伝子発現をリアルタイムPCRを用いて検討した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析およびフローサイトメトリー法によるオーバル細胞の分離、同定ともにおおむね順調に進展しているが、学会発表、論文作成のため追加実験を行う必要がある。

Strategy for Future Research Activity

CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析、初代培養オーバル細胞を用いたinvitroの実験系ともにこれまでの実験結果を再確認し、学会発表、論文発表に必要な追加実験を行う。

Causes of Carryover

前年度までに購入した試薬、抗体、特別食を節約して使用した結果、物品費が節約された。

Expenditure Plan for Carryover Budget

CARおよびPXRノックアウトマウスを用いた解析および初代培養オーバル細胞を用いたinvitroの実験系においてこれまで得られた結果を再検討し、学会発表、論文発表に必要な追加実験に必要な試薬、抗体などの物品費、学会への出張費、英文校正、投稿料などに使用する。