ＨＣＶ培養系を用いたＩ型・ＩＩＩ型インターフェロン不応性機構の解析

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24590960
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 大岡 真也 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 特任准教授 (90361691)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 朝比奈 靖浩 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 寄附講座教授 (00422692) ; 渡辺 守 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (10175127)
• Keywords: HCV / Cardif / IFNλ

Research Abstract

C型肝炎ウイルス（HCV）に対する新規HCV直接阻害剤（DAA）製剤導入後も宿主のインターフェロン（IFN）不応性は難治の主因となる。申請者は、自然免疫系IFN発現経路のRIG-IおよびCardifによって誘導されたISRE活性がHCVのNS3/4A蛋白だけでなくNS4B蛋白によっても抑制されることを見出した。この抑制作用は、TBK1,IKKεの誘導するISRE活性に対しては認めなかったことから、近年CardifとTBK1の間で働きIFN誘導に関わる分子として同定されたSTINGについて検討した。その結果RIG-IあるいはCardifによって誘導されたIFN-βpromoter活性は、NS3/4AだけでなくNS4Bによっても抑制されたのに対し、STINGの強制発現によって誘導されたIFN-βpromoter活性はNS3/4Aの発現によっては抑制されず、一方でNS4B発現時には強く抑制され、さらに下流のIRF3のリン酸化も抑制されていた。免疫沈降ではNS4BはCardifではなくSTINGとNS4Bと強く結合すると考えられ、免疫染色で細胞内局在を確認したところNS4BとSTINGとはほぼ完全に局在が一致していた。さらに生細胞での分子間相互作用を解析するためにBimolecular Fluorescence Complementation(BiFC)アッセイを行ったところ、HCV-NS4BとCardifとの共発現では弱い蛍光を観察したが、HCV-NS4BとSTINGとの共発現では、いずれの組み合わせにおいてもより強い蛍光を認めた。従って、HBV-NS4Bは宿主STINGと生細胞においても強く結合し、それにより宿主IFNシグナルを攪乱することで、HCVの自然免疫機構からの逃避機構に関与していることが示唆された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

HCV-NS4BとIFN産生応答関連蛋白のBiFCアッセイについてはおおむね順調に進行した。

Strategy for Future Research Activity

今後はHCV-NS4B蛋白がSTINGと結合するのに必要なドメイン検索を行い、自然に存在するHCV変異との関連や治療標的としての意義を検討する。また、HCV-NS4B蛋白とSTINGが関与するシグナル伝達においてI型IFNとIII型IFNの相互作用を検討する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

試薬等が計画当初より廉価で購入可能であったため。
検討する数・種類を拡大して解析を行うため、試薬を増量して購入する予定である。

Research Products

• [Journal Article] α-fetoprotein levels after interferon therapy and risk of hepatocarcinogenesis in chronic hepatitis C. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Tsuchiya K, Nishimura T, Muraoka M, Suzuki Y, Tamaki N, Yasui Y, Hosokawa T, Ueda K, Nakanishi H, Itakura J, Takahashi Y, Kurosaki M, Enomoto N, Nakagawa M, Kakinuma S, Watanabe M, Izumi N.
  • Journal Title: Hepatology Volume: 58 Pages: 1253-1262
  • DOI: 10.1002/hep.26442
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Guidelines for the Management of Hepatitis C Virus Infection. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Hayashi N, Izumi N, Koike K, Kumada H, Oketani M, Suzuki F, Takikawa H, Tanaka A, Tsubouchi H, Yotsuyanagi H: editors of the Drafting Committee for Hepatitis Management Guidelines.
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 43 Pages: 1-34
  • DOI: 10.1111/hepr.12020
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhibition of hepatocellular carcinoma by PegIFNα-2a in patients with chronic hepatitis C: a nationwide multicenter cooperative study. (2013)
  • Author(s): Izumi N, Asahina Y, Kurosaki M, Yamada G, Kawai T, Kajiwara E, Okamura Y, Takeuchi T, Yokosuka O, Kariyama K, Toyoda J, Inao M, Tanaka E, Moriwaki H, Adachi H, Katsushima S, Kudo M, Takaguchi K, Hiasa Y, Chayama K, Yatsuhashi H, Oketani M, Kumada H.
  • Journal Title: J Gastroenterol Volume: 48 Pages: 382-390
  • DOI: 10.1007/s00535-012-0641-9.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatitis C virus NS4B protein targets STING and abrogates RIG-I-mediated type-I interferon-dependent innate immunity. (2013)
  • Author(s): Nitta S, Sakamoto N, Nakagawa M, Kakinuma S, Mishima K, Kusano-Kitazume A, Kiyohashi K, Murakawa M, Nishimura-Sakurai Y, Azuma S, Tasaka-Fujita M, Asahina Y, Yoneyama M, Fujita T, Watanabe M.
  • Journal Title: Hepatology Volume: 57 Pages: 46-58
  • DOI: 10.1002/hep.26017
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Wnt5a signaling mediates biliary differentiation of fetal hepatic stem/progenitor cells in mice. (2013)
  • Author(s): Kiyohashi K, Kakinuma S, Kamiya A, Sakamoto N, Nitta S, Yamanaka H, Yoshino K, Fijuki J, Murakawa M, Kusano-Kitazume A, Shimizu H, Okamoto R, Azuma S, Nakagawa M, Asahina Y, Tanimizu N, Kikuchi A, Nakauchi H, Watanabe M.
  • Journal Title: Hepatology Volume: 57 Pages: 2502-2513
  • DOI: 10.1002/hep.26293
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical characteristics of patients who developed hepatocellular carcinoma after hepatitis C virus eradication with interferon therapy: current status in Japan. (2013)
  • Author(s): Sato A, SataM, Ikeda K, Kumada T, Izumi N, Asahina Y, Osaki Y, Chayama K, Kaneko S, Sakai A, Onji M, Hiasa Y, Omura T, Ozeki I, Yokosuka O, Shiina S, Itsubo M, Nishiguchi S, Hirano K, Ide T, Sakisaka S, Yamasaki T, Hidaka I, Tanaka M, Kim SR, Ichida T.
  • Journal Title: Intern Med Volume: 52 Pages: 2701-2706
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.52.1180
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Substitution of amino acid 70/91 in the hepatitis C virus core region affects infectious virus production and cell surface expression of MHC class I. (2013)
  • Author(s): Tasaka-Fujita M, Sugiyama N, Kang W, Murayama A, Asahina Y, Sakamoto N, Wakita T, Shin EC, Kato T.
  • Organizer: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease (AASLD The Liver Meeting 2013)
  • Place of Presentation: Washington DC(USA)
  • Year and Date: 20131101-20131105
• [Presentation] Impaired IL28B gene induction and expression of IFNλ4 are closely associated with a non-response to interferon-based therapy in chronic hepatitis C patients. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Murakawa M, NittaS, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Kakinuma S, Watanabe M.
  • Organizer: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease (AASLD The Liver Meeting 2013)
  • Place of Presentation: Washington DC(USA)
  • Year and Date: 20131101-20131105
• [Presentation] Serum interleukin-6 levels during treatment correlate with resistance to telaprevir-based triple therapy in chronic hepatitis C (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Nakagawa M, Taniguchi M, Kawai F, Fujiki J, Otani T, Yamanaka H, Murakawa M, Nitta S, Kitazume A, Watanabe T, Sakurai Y, Azuma S, Kakinuma S, Watanabe M.
  • Organizer: The 48th annual meeting of the European association for the study of the liver (EASL The International Liver Congress 2013)
  • Place of Presentation: Amusterdam(Netherlands)
  • Year and Date: 20130424-20130428