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2012 Fiscal Year Research-status Report

C型肝炎ウイルスによる糖代謝異常の分子機序の解明

Research Project

Project/Area Number 24590976
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

堀田 博  神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40116249)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 勝二 郁夫  神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40356241)
デン リン  神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40437497)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
KeywordsC型肝炎ウイルス / 感染症 / 糖新生 / FoxO1
Research Abstract

C型肝炎ウイルス(HCV)は慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌等を引き起こすのみならず、2型糖尿病や脂肪肝と密接な関連があることが臨床的に知られている。我々は、HCV感染が糖新生制御因子である転写因子FoxO1のリン酸化を抑制し活性化状態を持続させること、及び活性化されたFoxO1により、糖新生律速酵素遺伝子群の転写が促進され、肝細胞の糖新生が亢進することを明らかにした。今年度は、HCV感染によるFoxO1機能の脱制御(持続的活性化)に及ぼす脱リン酸化酵素の影響について検討し、以下の結果を得た。
(1) HCV感染・複製によりMAPK phosphatase-3 (MKP3)のmRNA及びタンパク質発現が亢進した。
(2) HCV感染によるMKP3タンパク質発現上昇は、抗酸化剤NACあるいはJNK阻害剤によって解除されたことから、HCV感染によるROS/JNK経路が、MKP3発現の増加に関与することが示唆された。
(3) MKP3はFoxO1との相互作用により、FoxO1を脱リン酸化することから、MKP3がFoxO1のリン酸化状態を制御すると考えられた。
(4) HCV感染細胞におけるMKP3が細胞質に限局することから、HCV感染が細胞質におけるFoxO1の脱リン酸化反応を促進することが示唆された。
以上の結果から、HCV感染細胞においては、酸化ストレス→JNK活性化→MKP3発現亢進→FoxO1脱リン酸化→FoxO1核内蓄積(FoxO1転写活性の亢進)→PEPCK及びG6Pase遺伝子の転写促進という機序を介して、糖新生が亢進することを提唱した。これらの成果は、ウイルス感染による糖代謝異常誘導の分子機序の解明に貢献するものである。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

これまでの研究でHCV感染がMAPK phosphatase-3 (MKP3)のmRNA及びタンパク質発現を促進することを介してFoxO1の脱リン酸化を惹起している可能性が明らかになった。
これらの成果は当初の計画通りであり、評価できると思われる。

Strategy for Future Research Activity

プロテインホスファターゼ 2A (PP2A)がFoxO1の脱リン化酵素であることが報告されている(Yan et al., J. Biol. Chem., 2008)。予備実験により、1) 非感染細胞に比べ、HCV感染細胞におけるPP2Aのcatalytic subunit (PP2Ac)発現量の変化は見られなかった。2) HCV感染細胞において、PP2AcのY307リン酸化(不活性型)の程度が顕著に増加したが、in vitroのpNPP Phosphatase Assayにて、PP2Acの酵素活性の低下は認められなかった。これらの知見を基に、PP2AがHCV感染によるFoxO1リン酸化抑制に関与するかどうかについて解析を進める。
(1) 高い特異性を持つキットであるPP2A Immunoprecipitation Phosphatase Assay Kitを用いてHCV感染細胞におけるPP2Aの酵素活性を測定する。
(2) PP2Aの強力な阻害剤であるCantharidic Acidを用いて、HCV感染によるFoxO1リン酸化抑制が解除されるかどうかを調べる。
(3) HCV感染により、PP2A のscaffold subunit (PP2A-A)及びregulatory subunit (PP2A-B)の発現量がどのように変化するのかを調べる。
(4) PP2Acの304番目のトレオニンのリン酸化及び309番目のロイシンのメチル化はPP2Aの酵素活性に重要であることが報告されているので、HCV感染により、PP2AcのThr304のリン酸化及びLeu309のメチル化状態を調べる。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

平成25年度の研究費は、免疫沈降やウェスタンブロッティング等を用いた解析に必要な試薬、抗体等に使用する予定である。
また、この成果を発表するために、国際及び国内学会に参加する旅費及び学術雑誌への投稿料等を計上する。

  • Research Products

    (23 results)

All 2013 2012 Other

All Journal Article (9 results) (of which Peer Reviewed: 9 results) Presentation (12 results) Remarks (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Polymorphisms of the core, NS3 and NS5A proteins of hepatitis C virus genotype 1b associate with development of hepatocellular carcinoma.2013

    • Author(s)
      El-Shamy A, Shindo M, Shoji I, Deng L, Okuno T, Hotta H.
    • Journal Title

      Hepatology

      Volume: in press Pages: in press

    • DOI

      0.1002/hep.26205

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Detection of highly prevalent hepatitis B virus co-infection with HIV in Indonesia.2013

    • Author(s)
      Utsumi T, Yano Y, Lusida MI, Nasronudin, Amin M, Juniastuti, Soetjipto, Hotta H, Hayashi Y.
    • Journal Title

      Hepatol Res

      Volume: in press Pages: in press

    • DOI

      10.1111/hepr.12053

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Hepatitis C virus infection suppresses GLUT2 gene expression via down-regulation of hepatocyte nuclear factor 1α.2012

    • Author(s)
      Matsui C, Shoji I, Kaneda S, Sianipar IR, Deng L, Hotta H.
    • Journal Title

      J Virol

      Volume: 86(23) Pages: 12903-12911

    • DOI

      10.1128/JVI.01418-12

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] HCV NS5A protein containing potential ligands for both Src homology 2 and 3 domains enhances autophosphorylation of Src family kinase Fyn in B cells.2012

    • Author(s)
      Nakashima K, Takeuchi K, Chihara K, Horiguchi T, Sun X, Deng L, Shoji I, Hotta H, Sada K.
    • Journal Title

      PLoS ONE

      Volume: 7(10) Pages: e46634

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0046634

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] NS5A sequence heterogeneity of hepatitis C virus genotype 4a predicts clinical outcome of pegylated-interferon/ribavirin therapy in Egyptian patients.2012

    • Author(s)
      El-Shamy A, Shoji I, El-Akel W, Bilasy SE, Deng L, El-Raziky M, Jiang DP, Esmat G, Hotta H.
    • Journal Title

      J Clin Microbiol

      Volume: 50(12) Pages: 3886-3892

    • DOI

      10.1128/JCM.02109-12

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Isolation of human monoclonal antibodies to the envelope E2 protein of hepatitis C virus and their characterization.2012

    • Author(s)
      Shimizu YK, Hijikata M, Oshima M, Shimizu K, Alter HJ, Purcell RH, Yoshikura H, Hotta H.
    • Journal Title

      PLoS ONE

      Volume: 8(2) Pages: e55874

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0055874

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mutations in non-structural 5A and rapid viral response to pegylated interferon-α-2b plus ribavirin therapy are associated with therapeutic efficacy in patients with genotype 1b chronic hepatitis C.2012

    • Author(s)
      Yano Y, et al.
    • Journal Title

      Int J Mol Med

      Volume: 30(5) Pages: 1048-1052

    • DOI

      10.3892/ijmm.2012.1093

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Prediction of response to pegylated interferon/ribavirin combination therapy for chronic hepatitis C genotype 1b and high viral load.2012

    • Author(s)
      Kim SR, El-Shamy A, Imoto S, Kim KI, Ide YH, Deng L, Shoji I, Tanaka Y, Hasegawa Y, Ota M, Hotta H.
    • Journal Title

      J Gastroenterol

      Volume: 47(10) Pages: 1143-1151

    • DOI

      10.1007/s00535-012-0578-z

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] C型慢性肝炎時から肝癌発生まで経過を追えたC型肝炎ウイルスジェノタイプ1bのコア蛋白アミノ酸多様性と肝癌発生との関連性2012

    • Author(s)
      進藤 道子, El-Shamy Ahmed, 奥野 忠雄, 堀田 博
    • Journal Title

      肝臓

      Volume: 53(9) Pages: 541-548

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Antiviral Activity of Indonesian Plants from East Java Region Againts Hepatitis C Virus.2013

    • Author(s)
      Wahyuni T S, et al.
    • Organizer
      International Conference on Natural Products
    • Place of Presentation
      Shah Alam, Malaysia
    • Year and Date
      20130304-20130306
  • [Presentation] C 型肝炎ウイルスNS5A 蛋白質のSrc homology 2/3 ドメイン結合能とB 細胞での発現によるSrc ファミリーキナーゼFyn の活性化2012

    • Author(s)
      中島 謙治,竹内 健司,千原 一泰,堀口 朋子,孫 雪東, Deng Lin,勝二 郁夫,堀田 博,定 清直
    • Organizer
      第35回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      20121211-20121214
  • [Presentation] C 型肝炎ウイルス感染はHNF-1 αの発現を負に制御しGLUT2 遺伝子発現を抑制する2012

    • Author(s)
      勝二 郁夫, 松井 千絵子, 兼田 祟作, Imelda Rosalyn Sianipar, Deng Lin, 堀田 博
    • Organizer
      第35回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      20121211-20121214
  • [Presentation] C型肝炎ウイルス感染によるBax活性化の分子機序の解析2012

    • Author(s)
      DENG Lin、勝二郁夫、堀田博
    • Organizer
      第65回日本細菌学会関西支部総会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      20121117-20121117
  • [Presentation] C型肝炎ウイルス感染による転写因子FoxO1脱リン酸化の分子機序の解析2012

    • Author(s)
      DENG Lin、金子 昌裕、河本 真理、姜 大鵬、勝二 郁夫、堀田 博
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121113-20121115
  • [Presentation] C型肝炎ウイルスによるGLUT2遺伝子発現抑制の分子機構2012

    • Author(s)
      松井 千絵子、勝二 郁夫、DENG Lin、堀田 博
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121113-20121115
  • [Presentation] C型肝炎ウイルスNS5A蛋白質の新規結合因子ヒストンメチル基転移酵素SMYD3の同定と機能解析2012

    • Author(s)
      陳 明、甘 翔、DENG Lin、勝二 郁夫、堀田 博
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121113-20121115
  • [Presentation] C型肝炎ウイルスに対する予防および治療ワクチン開発に関する研究2012

    • Author(s)
      姜 大鵬、Ratnoglik Lulut Suratno1、青木 千恵、Deng Lin、勝二 郁夫、堀田 博
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121113-20121115
  • [Presentation] Up-regulation of MAPK phosphatase 3 is involved in HCV-induced suppression of FoxO1 phosphorylation.2012

    • Author(s)
      Deng L, Chen M, Jiang DP, Shoji I, Hotta H.
    • Organizer
      19th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
    • Place of Presentation
      Venice, Italy
    • Year and Date
      20121005-20121009
  • [Presentation] Identification and characterization of a novel NS5A-interacting protein, SMYD3.2012

    • Author(s)
      Chen M, Gan X, Deng L, Shoji I, Hotta H.
    • Organizer
      19th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
    • Place of Presentation
      Venice, Italy
    • Year and Date
      20121005-20121009
  • [Presentation] HCV infection induces lysosomal degradation of hepatocyte nuclear factor 1α via interaction with HCV NS5A protein.2012

    • Author(s)
      Matsui C, Shoji I, Deng L, Hotta H.
    • Organizer
      19th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
    • Place of Presentation
      Venice, Italy
    • Year and Date
      20121005-20121009
  • [Presentation] Development of therapeutic and preventive vaccines against Hepatitis C virus.2012

    • Author(s)
      Jiang DP, Ratnoglik S L, Aoki C, Deng L, Shoji I, Hotta H.
    • Organizer
      19th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
    • Place of Presentation
      Venice, Italy
    • Year and Date
      20121005-20121009
  • [Remarks] 神戸大学医学研究科微生物学分野 研究内容

    • URL

      http://www.med.kobe-u.ac.jp/micro/research-2.htm

  • [Patent(Industrial Property Rights)] C型肝炎ウイルス粒子形成促進剤及び株の評価方法及びC型肝炎ウイルス粒子の産生方法2012

    • Inventor(s)
      堀田博
    • Industrial Property Rights Holder
      堀田博
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      2012-215474
    • Filing Date
      2012-09-28

URL: 

Published: 2014-07-24  

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