2015 Fiscal Year Annual Research Report
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24591275
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
永井 真貴子 北里大学, 医学部, 講師 (80420488)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 筋萎縮性側索硬化症 / トランスジェニックマウス / TDP-43 / アデノ随伴ウイルス / 脊髄前角細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1)トランスジェニックマウスの作製
神経細胞特異的に発現するThy-1プロモーターを使用し，その下流にLoxP 配列で挟んだ赤色蛍光色素であるdsRed cDNA，さらにその下流に正常型TDP-43 cDNA を挿入したトランスジェニックマウスを作製した。作成したトランスジェニックマウスの大脳・脊髄をホルマリン固定後，組織を薄切し解析した。マウス大脳皮質の神経細胞，錐体路，脊髄前角の運動神経細胞に赤色蛍光色素の発現が確認でき，目的のトランスジェニックマウスを確立できたと考えた。続いて理研より供与されたVAChT-Creトランスジェニックマウスと交配を開始した。VAChT-Creトランスジェニックマウスは，運動神経細胞特異的にCreが発現するマウスで，交配により，loxPに挟まれた配列が排除され，代わりにその下流にあるTDP-43cDNAにより，TDP-43蛋白が発現した。ALS様症状の発症がなく，期間を1年延長して経過を観察したが，臨床症状は発現しなかった。
(2) アデノ随伴ウィルス（AAV1ウィルス）によるTDP-43/OPTN発現マウスの作製
正常型TDP43(WT-TDP43), 変異型TDP43（A315T-TDP43, TDP43-C末端断片），正常型OPTN（WT-OPTN），変異型OPTN（E478G-OPTN）のcDNAを組み込んだAAV1ウィルスを作製した。ウィルスを片側腰髄の前角に注入すると2週間後から運動神経細胞にTDP43/OPTN蛋白が発現した。このTDP-43の過剰発現ではマウスの運動神経細胞死が起こり，一側下肢の麻痺が出現した。細胞死は核内に発現が認められた，正常型TDP43およびA315T-TDP43で急速に起こり，一方TDP43-C末端断片は細胞質に発現が認められ，細胞変性は緩徐に起こった。論文作製中である。
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