2013 Fiscal Year Research-status Report
劇症１型糖尿病の病因・病態の解明及び新たな治療法の開発
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24591320
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
遠藤 登代志 山梨大学, 医学工学総合研究部, 医学研究員 (00152017)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
金重 勝博 山梨大学, 医学部附属病院, 助教 (20377518)
小林 哲郎 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (30113442)
田中 昌一郎 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (70377521)
滝澤 壮一 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (80456467)
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| Keywords | 劇症１型糖尿病 / Amylaseα-2A / 自己抗体 / 慢性膵炎 / DNA 免疫 |
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| Research Abstract |
劇症１型糖尿病は急激に発症する極めて重篤な糖尿病であり、その迅速な診断法としてAmylaseα-2A (AMY)に対する自己抗体(AMY-Ab)をELISA法にて検出することが有用である。しかし、この測定法はbackgroundが比較的高く更に改良が必要であるため、Amylaseα-2Aを21～25アミノ酸からなるペプチドを合成し、これらを抗原としてELISAを行った。その結果、Amylaseα-2AのC末端に近いペプチド７を用いた際に、従来の結果がほぼ再現され、かつbackgroundが低下することが判明した。
この改良ELISAにて種々の膵関連疾患の血中AMY-Abの有無を検討した結果、劇症１型糖尿病、自己免疫性膵炎患者での陽性率が高く、また一部アルコール性慢性膵炎患者にも陽性者が散見される。膵癌患者ではほとんどが陰性であった。興味深いことに非アルコール性慢性膵炎患者中にも陽性者が存在することが明らかとなった。
一方、AMY-Abの意義を明らかにする目的にて、AMYをマウスに免疫するモデルを開発中であるが、AMY cDNAをin vivo electroporation法にて免疫することにより高率に膵島炎を惹起しうることが判明した。病理学的には膵島周囲への細胞浸潤が認められるが空腹時血糖は正常マウスとの差が無く、現在さらに詳細に耐糖能につき解析の予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
① ELISA改良：ペプチド７によるELISAが完成し種々の膵疾患患者でのAMY-Abが検出できるようになって来た。このためほぼ当初の目標の達成に近づいたと言える。
② 膵島炎モデルマウスの解析:このモデルの作成に当初、E.coliにて産生したリコンビナントAmylaseα-2Aを抗原として使用したが、実験中にこれらに高濃度のエンドトキシンが含まれることが判明し、この影響は無視できないと考え、現在AMY-cDNAのDNA 免疫に方法を変更した。この抗原の免疫にても膵島周囲炎が惹起され、AMY抗体性膵炎と考えられ、ほぼ当初の計画通りに進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
① ELISAによるAMY抗体の検出：
AMYペプチド７コートELISAにて正常、種々の膵疾患患者でのAMY抗体の検出頻度を確定する。また、インスリン分泌能、膵外分泌機能、アルコール摂取暦などを同時に検討し、AMY抗体価との関連を探り、本抗体の意義や新たな病態の有無などの解明に努める。
② 膵島炎モデルマウスの解析
現在、AMY-cDNAのDNA 免疫にてモデルが作成されている。耐糖能は糖負荷試験などを行いさらに検討する。またCXCL-10やinterferon-γなどとの関連などとの検討も進め、AMY-Abと劇症１型糖尿病の関連や他の種々の膵疾患におけるAMY-Abの意義を明らかにする予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究が、思ったよりスムーズに進み、予定していたより低予算で研究が進んだため。
研究試薬、データ管理：ELISA実施のための研究試薬の購入。組織学的検討のための標本作成、及びデータ解析・統計ソフトなどの購入、その他、実験動物購入およびガラス器具等を購入する。
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