2013 Fiscal Year Research-status Report
下垂体腺腫におけるマイクロＲＮＡ分子ネットワークの解明
| Project/Area Number |
24591365
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokushima |
|---|
Principal Investigator |
吉本 勝彦 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (90201863)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩田 武男 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教 (10350399)
水澤 典子 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教 (80254746)
|
|---|
| Keywords | 下垂体腺腫 / miRNA |
|---|
| Research Abstract |
マイクロアレイ解析のデータから，各タイプの腺腫で特徴的な発現を示すmiRNA候補を選別し，各タイプの下垂体腺腫でのそれらのmiRNA発現量をqRT-PCRで検証した。
正常下垂体，GH，PRL，ACTH，FSH/LH，ナルセルの各腺腫間で発現量に差異が認められるmiRNAを同定した。このうち正常下垂体とACTH産生腺腫あるいはFSH/LH産生腺腫間で顕著な発現量の差異が認められたmiR-132，miR-137，miR-551bについて，マウスの各組織での発現量を比較検討し，これらが下垂体と大脳で高発現していることを示した。
ACTH産生腺腫で低発現を示したmiR-132およびmiR-551bを，ACTH産生細胞由来細胞株AtT-20に過剰発現させると細胞増殖が抑制されたが，ヒト腎線維芽細胞株293FT細胞では抑制が認められなかったことから，これらのmiRNAがACTH産生細胞特異的に細胞増殖を抑制することを示した。
miR-551bの標的遺伝子候補をin silico解析により検討し，候補遺伝子として選んだERBB4 mRNAを高発現しているACTH産生腺腫を認めた。さらにmiR-551bとルシフェラーゼ-ERBB4 3'UTRを含むレポータープラスミドの導入細胞のルシフェラーゼアッセイにより，ERBB4がmiR-551bの標的遺伝子であることを示した。ACTH産生腺腫におけるmiR-551bの低発現と，そのプロモーター部位のCpGアイランドのメチル化には関連性を認めなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ACTH産生腺腫で特徴的なmiRNAの発現パターンを明らかにできた。他のタイプに特徴的なmiRNAの発現パターンおよびその意義の解明が今後必要である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
GH腺腫および FSH/LH腺腫、null cell腺腫、ACTH腺腫における14q32.3 miRNAs発現機序の解析
1）14q32.3領域のゲノムコピー数の解析
GH腺腫においては14q32.3領域のゲノムコピー数が増幅、FSH/LH腺腫、null cell腺腫、ACTH腺腫においては欠失している可能性について検討する。
2）14q32.3領域におけるDNA調節領域のメチル化の解析
GH腺腫においてはloss of imprinting（低メチル化）、他の腺腫においてはgain of imprinting（高メチル化）により14q32.3 miRNAsの発現が調節されている可能性がある。正常下垂体および各タイプの腺腫ゲノムDNAにおける14q32.3領域におけるDNA調節領域 のメチル化状態をbisulfite sequencing法にて解析する。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
当初予定した消耗品が節約できたため、次年度に繰り越した。
物品費、旅費、その他（機器使用料、論文校正料、論文投稿料）に用いる予定。
|
