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2012 Fiscal Year Research-status Report

サイトメガロウイルス感染症に対する新規抗ウイルス剤の分子基盤の解明

Research Project

Project/Area Number 24591492
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionHokuriku University

Principal Investigator

村山 次哉  北陸大学, 薬学部, 教授 (60159184)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 定成 秀貴  北陸大学, 北陸大学・薬学部, 助教 (60121274)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywordsサイトメガロウイルス / トリシン / 抗ウイルス薬
Research Abstract

研究計画:ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)感染細胞に対するトリシン(4’, 5, 7-trihydroxy- 3’, 5’- dimethoxyflavone)の作用に関連する遺伝子・転写産物を網羅的に解析して、その候補分子とトリシン作用との関連性を検証する。
H24年度の成果:1、ヒト胎児肺線維芽細胞(HEL)にHCMVを感染させ、トリシン濃度0.1-1.0-10 マイクロモルとの共培養を行い、経時的(感染後4-8-24-48-72時間)に細胞RNAを抽出し、逆転写酵素を用いcDNA合成を行った。
2、ヒトおよびHCMV遺伝子を搭載したDNAチップ(アジレント社製特別発注品)を用いて、感染初期から後期における宿主細胞由来およびウイルス由来の遺伝子の発現変動を網羅的に解析し、対照(未感染細胞)と比較して4倍以上に発現上昇や発現低下した遺伝子を選定し、宿主細胞由来とウイルス由来別に抽出してクラスター分析を細胞毎に行い、さらにRT- PCR法にて選定遺伝子を定量した。その結果、興味あるいくつかのサイトカイン遺伝子が有意な変動を示すことが確認された。
3、発現上昇が見られた宿主細胞由来のサイトカイン遺伝子を抑制するために、siRNAの遺伝子導入により遺伝子ノックダウンした細胞を用いてトリシンの作用を検討したところ、その作用が抑制されたことから、少なくともあるサイトカインがトリシンの抗ウイルス作用に関係している事が示唆された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

DNAチップを用いた宿主細胞由来およびウイルス由来の遺伝子の発現変動の網羅的な解析、siRNAの選定および遺伝子導入等が比較的順調に進んだため、今年度は研究計画に沿っておおむね順調に進展する事ができた。

Strategy for Future Research Activity

1、H24年度に引き続き、HCMV感染およびトリシン処理により変動した複数の宿主細胞由来サイトカイン遺伝子の検証を行い、さらにsiRNAによる目的遺伝子のノックダウン、トリシンに対する反応性等を確認・精査する。
2、トリシン反応関連遺伝子が確認・同定できたら、細胞内シグナル伝達経路について解析する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

今後の研究遂行に必要な物品費および研究成果発表に伴う旅費や論文作成に伴う経費等に使用する。

  • Research Products

    (12 results)

All 2013 2012

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (7 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results) (of which Overseas: 1 results)

  • [Journal Article] Transgenic rice seed synthesizing diverse flavonoids at high levels: a new platform for flavonoid production with associated health benefits2013

    • Author(s)
      Yuko Ogo, Kenjiro Ozawa, Tsutomu Ishimaru, Tsugiya Murayama and Fumio Takaiwa
    • Journal Title

      Plant Biotechnology Journal

      Volume: XX Pages: 1-13

    • DOI

      doi: 10.1111/pbi.12064

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Anti-cytomegalovirus effects of tricin are dependent on CXCL11.2012

    • Author(s)
      T. Murayama, Y. Li, T. Takahasi, R. Yamada, K. Matsubara, Y. Tuchida, X. Zheng, H. Sadanari
    • Journal Title

      Microbes Infection

      Volume: 14 Pages: 1086-1092

    • DOI

      10.1016/j.micinf.2012.05.017

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Herpes Simplex Virus Requires PARP Activity for Efficient Replication and Induces ERK-dependent Phosphorylation and ICP0-dependent Nuclear Localization of Tankyrase 12012

    • Author(s)
      Zhuan Li, Yohei Yamauchi, Maki Kamakura, Tsugiya Murayama, Fumi Goshima, Hiroshi Kimura, and Yukihiro Nishiyama
    • Journal Title

      J. Virol

      Volume: 86 Pages: 492-503

    • DOI

      doi: 10.1128/JVI.05897-11

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Ganciclovirとtricinによる抗ヒトサイトメガロウイルス作用の検討2013

    • Author(s)
      山田理恵、須田英揮、馬場昌範、土田裕三、定成秀貴、村山次哉
    • Organizer
      日本薬学会第133年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20130327-20130330
  • [Presentation] Inhibitory effects of simvastatin on human cytomegalovirus replication through altered expression of a chemokine, C-X-C motif ligand 11 in human embryonic lung cells2012

    • Author(s)
      Takashi Takahashi, Tsugiya Murayama, Ying Li, Rie Yamada, Keiko Matsubara, Xin Zheng, Hidetaka Sadanari
    • Organizer
      The 11th East Asian Conference on Infection Control and Prevention
    • Place of Presentation
      Tokyo, Japan
    • Year and Date
      20121115-20121116
  • [Presentation] ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)の初期―後期遺伝子と後期遺伝子のプロモーター活性を利用した抗HCMV剤検索システムの検討2012

    • Author(s)
      定成秀貴、長尾嘉真、三谷逸人、安井真一、山田理恵、村山次哉
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121112-20121115
  • [Presentation] Ganciclovirとtricinによる抗ヒトサイトメガロウイルス作用の相乗効果2012

    • Author(s)
      村山次哉、須田英揮、馬場昌範、土田裕三、山田理恵、定成秀貴
    • Organizer
      第60回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      20121112-20121115
  • [Presentation] ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)に対する抗ウイルス剤検索に利用可能なHCMV遺伝子の検討2012

    • Author(s)
      定成秀貴、長尾嘉真、三谷逸人、安井真一、山田理恵、村山次哉
    • Organizer
      第49回日本細菌学会中部支部総会
    • Place of Presentation
      金沢
    • Year and Date
      20121109-20121110
  • [Presentation] CXCL11-dependent anti-cytomegalovirus effects of tricin2012

    • Author(s)
      Tsugiya Murayama,Ying Li, Yuuzo Tuchida, Takashi Takahashi, Rie Yamada, Hidetaka Sadanari
    • Organizer
      14th International CMV/Betaherpesvirus workshop
    • Place of Presentation
      San Francisco, CA, USA
    • Year and Date
      20121029-20121102
  • [Presentation] Action mechanisms of tricin on anti-cytomegalovirus effect2012

    • Author(s)
      Tsugiya Murayama, Yuuzo Tuchida, Rie Yamada, Hidetaka Sadanari, Keiko Matsubara
    • Organizer
      25rd International conference on antiviral research
    • Place of Presentation
      Sapporo, Japan
    • Year and Date
      20120416-20120419
  • [Book] 応用細胞補完代替医療学2012

    • Author(s)
      村山次哉
    • Total Pages
      93
    • Publisher
      大学教育出版
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 抗ウイルス剤2012

    • Inventor(s)
      村山次哉、土田裕三、渡辺邦友、纐纈守、土田康太郎、桜井大輔
    • Industrial Property Rights Holder
      村山次哉、土田裕三、渡辺邦友、纐纈守、土田康太郎、桜井大輔
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      OP08015-3-2
    • Filing Date
      2012-09-16
    • Acquisition Date
      2013-01-18
    • Overseas

URL: 

Published: 2014-07-24  

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