2012 Fiscal Year Research-status Report
マイクロＲＮＡを用いたトリプルネガティブ乳癌に対する新規治療薬の開発
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24591916
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
遠山 竜也 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30315882)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉本 信保 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10551244)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 乳癌 / miR-210 |
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| Research Abstract |
本研究は、エストロゲン・レセプター（ER）陰性・プロゲステロン・レセプター（PgR）陰性・HER2陰性の、いわゆるトリプルネガティブ（TN）乳癌において、特徴的に高発現している低酸素関連「マイクロRNA」に着目し、TN乳癌に対する新規治療薬の開発を目指した研究である。具体的には、低酸素関連「マイクロRNA(miR)-210」をノックダウンしたTN乳癌に化学療法を行うことにより、化学療法抵抗性のTN乳癌に対する化学療法感受性の増強、すなわち、化学療法増感薬としての「miR-210ノックダウン療法」の意義について検討する。
まず、161例の乳癌組織（TN乳癌58例、エストロゲン・レセプター陽性HER2陰性103例）から抽出したRNAを用いて、乳癌組織におけるmiR-210発現を検討した結果、TN乳癌におけるmiR-210発現はER陽性HER2陰性乳癌と比較して有意に高いことが示された。また、TN乳癌におけるmiR-210高発現症例は、miR-210低発現症例と比較して有意に予後不良であることがわかった。さらに、miR-210はTN乳癌において独立した予後因子であることが示された。
今後は、トリプルネガティブ(TN)乳癌細胞株を用いて、低酸素環境におけるmiR-210の機能について解明したい。さらには、ヌードマウスを用いたXenograftモデルにより、TN乳癌細胞に対するmiR-210ノックダウンの抗腫瘍効果（化学療法への相乗効果）について解析することを目標とする。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
乳癌組織を用いた実験はおおむね予定通り施行したが、細胞株を用いた実験がまだ軌道に乗っていないため「やや遅れている」を選択した。
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| Strategy for Future Research Activity |
乳癌組織を用いた検討はおおむね終了したため、今後は、トリプルネガティブ(TN)乳癌細胞株を用いて、低酸素環境におけるmiR-210の機能について解明したい。さらには、ヌードマウスを用いたXenograftモデルにより、TN乳癌細胞に対するmiR-210ノックダウンの抗腫瘍効果（化学療法への相乗効果）について解析することを目標とする。
具体的には、TN乳癌細胞株を用いたmiR-210の標的遺伝子候補の解析、TN乳癌細胞株を用いた細胞増殖能アッセイ、TN乳癌細胞株の細胞周期および細胞死の解析、TN乳癌細胞株におけるmiR-210発現と低酸素関連因子の検討、さらには、Xenograft モデルを用いた検討 ①：ヌードマウスへ移植したTN乳癌細胞におけるmiR-210発現状況の検討、Xenograft モデルを用いた検討 ②：miR-210高発現のTN乳癌細胞に対するmiR-210ノックダウンの検討を進めていきたい。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
TN乳癌細胞株を用いたmiR-210の標的遺伝子候補の解析:miR-210の標的遺伝子候補としてmiR-210の標的遺伝子候補として「ミトコンドリア機能（酸素呼吸能）」に関与する2つの遺伝子（ISCU, SDHD）が報告されているが、異なる酸素濃度（0.2-20%）における、これらの標的蛋白発現を、上述した10種類のTN乳癌細胞株を用いて、ウエスタン・ブロット法にて解析する。
また、TN乳癌細胞株を用いた細胞増殖能アッセイ:TN乳癌細胞株では低酸素環境においてmiR-210を高発現していると予想されるが、miR-210発現を抑制した場合、miR-210をさらに強制発現した場合における細胞増殖能を、異なる酸素濃度（0.2-20%）において解析する。
TN乳癌細胞株の細胞周期および細胞死の解析：異なる酸素濃度（0.2-20%）において、TN乳癌細胞株を用いた細胞周期および細胞死の解析を、フローサイトメトリーおよびBrdU取り込みアッセイにて行う（細胞周期判定キットNuclear-ID Cell Cycle Analysis Kit（フナコシ）、ModFiTソフトウエア-（BD Bioscience）、フローサイトメトリーは当研究室に設置済み）。miR-210発現を抑制した場合およびmiR-210をさらに強制発現した場合においても解析する。
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