2012 Fiscal Year Research-status Report
人工関節再置換率抑制を目指す、マイクロＲＮＡ・ＥＰ４作動薬併用による新規治療法
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24592245
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
小坂 泰一 東京医科大学, 医学部, 助教 (10328213)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 謙吾 東京医科大学, 医学部, 教授 (10246316)
澤地 恭昇 東京医科大学, 医学部, ポストドクター (20571152)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | APL / EP4 agonist / miRNA / PLFs |
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| Research Abstract |
(目的) 我々はプロスタノイド受容体の一つであるEP4を活性化するとaseptic prosthesis loosening(APL)が抑制されることを示唆してきた。本研究はEP4の活性化によって発現変動するmiRNAの探索を行った。 (方法) 患者由来PLFs (n=4) およびRA滑膜細胞 (n=4) を、A群: コントロール群 (EP4 agonist-, IL-1b-)、B群: EP4 agonist 刺激群 (EP4 agonist+, IL-1b-)、C群: IL-1b刺激群 (EP4 agonist-, IL-1b+)、D群: EP4 agonist/ IL-1b刺激群 (EP4 agonist+, IL-1b+) に分けて培養した。EP4 agonistは1 μM、 IL-1bは10 ng/ml で用い、24時間培養後total RNAを回収しmiRNA array (Agilent) を行った。発現解析は各症例においてB群/A群、D群/C群の値を算出し、2倍以上または0.5倍以下となっているmiRNAを変動ありとした。
(結果と考察) RA滑膜細胞へのEP4 agonist 刺激では、全症例でmiR-132-3pとmiR-543の発現が上昇した。またIL-1b 存在下でのEP4 agonist 刺激では、3例でmiR-155-5pの減少を認めた。これらのmiRNAに着目しPLFsでの解析を行った結果、EP4 agonist 刺激では、2例でmiR-132-3pが上昇したが、miR-543の変動は認められなかった。さらにIL-1b 存在下でのEP4 agonist 刺激ではmiR-155-5pは4例とも減少傾向にあるものの、0.5倍以下への減少は1例のみであった。これらのmiRNAはAPLにおけるEP4 agonistの代替治療薬となり得ることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
材料は人工関節再置換術の手術過程の一部として生じたPLFsを用いたが、今年度の再置換術の手術件数に制限があり、現在のところEP4 agonistの代替治療薬となり得るmiRNAの同定にはさらに検体数を増やして解析を行う必要があると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度得られた結果にさらに検体数を増やして解析を行うと同時に、rtPCRを用いた確認を並行して行う。また同定されたmiRNA単独、またEP4 agonistとの併用によるAPL抑制効果を細胞、組織レベルで検討する予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
今回得られた結果を、W-B法、Rt-PCRほかで確認し、そのうえで今回の結果をふまえEP4 agonist, 合成micro RNAの投与方法を細胞レベルで確認するにあたり。それぞれに必要なプライマーの作製、試薬の購入などに充てる。
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