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2012 Fiscal Year Research-status Report

転写因子Smadを介したTGF-βファミリーによる骨格・筋組織の調節機構の解明

Research Project

Project/Area Number 24592278
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionSaitama Medical University

Principal Investigator

米山 克美  埼玉医科大学, 医学部, 助手 (20571574)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 片桐 岳信  埼玉医科大学, 医学部, 教授 (80245802)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywords転写因子 / 細胞内情報伝達 / 分化 / 骨格筋 / 運動器
Research Abstract

Transforming Growth Factor-β(TGF-β)ファミリーに分類される成長因子群は、筋骨格系の運動器の発生や維持、再生に重要なことが知られている。この分子メカニズムを解明する目的で、TGF-βの細胞内情報伝達系に共通して重要な転写因子Smad4の遺伝子を誘導性に欠失させることができる遺伝子改変マウスを解析した。骨格筋組織特異的にSmad4依存的な細胞内シグナルの遮断は、マウスに致死性であることが明らかとなった。骨格筋組織における変化を生化学的・分子生物学的に解析すると共に、マウス筋組織から分離した細胞をin vitroで培養し、Smad4依存的なシグナルの役割を解析中である。
また、BMPの下流で情報伝達に関与すると考えられているR-Smadの中で、Smad8の転写活性が著しく弱いことを見出した。この原因は、リンカー領域内のアミノ酸の欠失によるものと推定された。BMPで活性化されるR-Smadにおけるリンカー領域の生理的役割を解明し、情報伝達機構の分子メカニズムを解析中である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成24年度には、細胞特異的なSmad4遺伝子欠失マウスの樹立とその解析を計画した。実際、骨格筋組織特異的なSmad4欠失マウスを作成することに成功した。しかし、本マウスは致死性で、出生後の成長に伴う骨格筋組織の解析が不可能であることが判明した。これは、Smad4が骨格筋に極めて重要な転写因子であり、その下流の標的遺伝子等が骨格筋細胞の分化や機能発現に重要な役割をはたすことを示唆する。本マウスから細胞を分取し、in vitroで培養可能な実験モデルも樹立した。この細胞を用いて、骨格筋に重要な遺伝子等を探索することが可能となる。

Strategy for Future Research Activity

骨格筋組織におけるSmad4遺伝子欠失マウスが致死性であることが判明したことから、in vitroで、培養細胞を用いてSmad4の標的遺伝子等を解析する必要があると考えられた。すでに、Smad4の発現を人為的に制御できる細胞株を樹立したことから、本実験モデルを中心としてマイクロアレイでSmad4の標的遺伝子を探索する。すでに我々は、Smad4がマウス筋芽細胞C2C12においても筋分化に重要なことを報告しており、C2C12細胞におけるSmad4の標的遺伝子も併せて探索する。候補遺伝子を同定し、これらを発現ベクターにクローニングして、一過性の過剰発現実験を行い、筋分化や増殖における効果を検討する。さらに、重要性が示された因子に関してはsiRNAによるノックダウン実験や、ノックアウトマウスの解析を試みる予定である。なお、連携研究者として参加を計画していた大手聡と笹沼寛樹がH24年度末で転出したため、H25年度から新たに大澤賢次(埼玉医科大学・病態生理部門・助教)を連携研究者に加え骨格筋の解析を行うこととする。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

Smad4の標的遺伝子を探索するためのマイクロアレイ解析は、正確性や効率を考慮して専門業者(ミルテニー社を予定)に委託する。1サンプル当たり約10万円を要するため、再現性等を考慮して80万円を支出予定である。また、本マイクロアレイデータを解析するためのコンピュータを1台購入する必要がある(約20万円)。この他に、遺伝子導入試薬Lipofectamine 2000、細胞培養用ウシ胎児血清、ディスポーザブル機器、一般試薬等を購入予定である。また、マウスを飼育するための費用を要する。

  • Research Products

    (30 results)

All 2013 2012

All Journal Article (10 results) (of which Peer Reviewed: 10 results) Presentation (20 results)

  • [Journal Article] Identification of a novel bone morphogenetic protein (BMP)-inducible transcript, BMP-inducible transcript-1, by utilizing the conserved BMP-responsive elements in the Id genes2013

    • Author(s)
      Shin M, Ohte S, Fukuda T, Sasanuma H, Yoneyama K, Kokabu S, Miyamoto A, Tsukamoto S, Hohjoh H, Jimi E, Katagiri T
    • Journal Title

      Journal of Bone and Mineral Metabolism

      Volume: 31 Pages: 34-43

    • DOI

      10.1007/s00774-012-0381-1

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Clinically applicable antianginal agents suppress osteoblastic transformation of myogenic cells and heterotopic ossifications in mice2013

    • Author(s)
      Yamamoto R, Matsushita M, Kitoh H, Masuda A, Ito M, Katagiri T, Kawai T, Ishiguro N, Ohno K.
    • Journal Title

      Journal of Bone and Mineral Metabolism

      Volume: 31 Pages: 26-33

    • DOI

      10.1007/s00774-012-0380-2

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Identification and functional analysis of Zranb2 as a novel Smad-binding protein that suppresses BMP signaling2012

    • Author(s)
      Ohte S, Kokabu S, Iemura S, Sasanuma H, Yoneyama K, Shin M, Suzuki S, Fukuda T, Nakamura Y, Jimi E, Katagiri T.
    • Journal Title

      Journal of Cellular Biochemistry

      Volume: 113 Pages: 808-814

    • DOI

      10.1002/jcb.23408

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Trichocyalides A and B, new inhibitors of alkaline phosphatase activity in bone morphogenetic protein-stimulated myoblasts, produced by Trichoderma sp. FKI-55132012

    • Author(s)
      Fukuda T, Uchida R, Ohte S, Inoue H, Yamazaki H, Matsuda D, Nonaka K, Masuma R, Katagiri T, Tomoda H.
    • Journal Title

      The Journal of antibiotics (Tokyo)

      Volume: 65 Pages: 565-569

    • DOI

      10.1038/ja.2012.70

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Fungal pyrrolidine-containing metabolites inhibit alkaline phosphatase activity in bone morphogenetic protein-stimulated myoblastoma cells.2012

    • Author(s)
      Fukuda T, Uchida R, Inoue H, Ohte S, Yamazaki Y, Matsuda D, Katagiri T, Tomoda H.
    • Journal Title

      Acta Pharmaceutica Sinica B

      Volume: 2 Pages: 23-27

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Disease-causing allele-specific silencing against the ALK2 mutants, R206H and G356D, in fibrodysplasia ossificans progressiva2012

    • Author(s)
      Takahashi M, Katagiri T, Furuya H, Hohjoh H.
    • Journal Title

      Gene Therapy

      Volume: 19 Pages: 781-785

    • DOI

      10.1038/gt.2011.193

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Role of osteoglycin in the linkage between muscle and bone2012

    • Author(s)
      Tanaka K, Matsumoto E, Higashimaki Y, Katagiri T, Sugimoto T, Seino S, Kaji H.
    • Journal Title

      The Journal of Biological Chemistry

      Volume: 287 Pages: 11616-11628

    • DOI

      10.1074/jbc.M111.292193

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Accumulation of p100, a precursor of NF-κB2, enhances osteoblastic differentiation in vitro and bone formation in vivo in aly/aly mice2012

    • Author(s)
      Seo Y, Fukushima H, Maruyama T, Kuroishi KN, Osawa K, Nagano K, Aoki K, Weih F, Doi T, Zhang M, Ohya K, Katagiri T, Hosokawa R, Jimi E
    • Journal Title

      Molecular Endocrinology

      Volume: 26 Pages: 414-422

    • DOI

      10.1210/me.2011-1241

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Ubc9 negatively regulates BMP-mediated osteoblastic differentiation in cultured cells2012

    • Author(s)
      Yukita A, Hosoya A, Ito Y, Katagiri T, Asashima M, Nakamura H.
    • Journal Title

      Bone

      Volume: 50 Pages: 1092-1099

    • DOI

      10.1016/j.bone.2012.02.008

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] BMP3 suppresses osteoblast differentiation of bone marrow stromal cells via interaction with Acvr2b2012

    • Author(s)
      Kokabu S, Gamer L, Cox K, Lowery J, Tsuji K, Raz R, Economides A, Katagiri T, Rosen V.
    • Journal Title

      Molecular Endocrinology

      Volume: 26 Pages: 87-94

    • DOI

      10.1210/me.2011-1168

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Establishmrent and analysis of Dox-inducible ALK2-expressiong C2C12 cell lines2012

    • Author(s)
      Katsumi Yoneyama, Sho Tsukamoto, Satoshi Ohte, Hiroki Sasanuma, Mai Fujimoto, Arei Miyamoto, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] A role of satellite cells in heterotopic bone formation in skeletal muscle induced by BMP signaling2012

    • Author(s)
      Hiroki Sasanuma, Katsumi Yoneyama, Satoshi Ohte, Sho Tsukamoto, Mai Fujimoto, Arei Miyamoto, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] Analysis of intracellular signaling pathway important for heterotopic bone-induction by BMPs2012

    • Author(s)
      Sho Tsukamoto, Satoshi Ohte, Katsumi Yoneyama, Mai Fujimoto, Hiroki Sasanuma, Arei Miyamoto, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] Thr203 in ALK2 is a critical residue for activation by BMP type II receptors.2012

    • Author(s)
      Satoshi Ohte, Mai Fujimoto, Katsumi Yoneyama, Hiroki Sasanuma, Sho Tsukamoto, Arei Miyamoto, Shoichiro Kokabu, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] Functional analysis of novel ALK2 mutant identified in fibrodyaplasia ossificans progressiva.2012

    • Author(s)
      Mai Fujimoto, Satoshi Ohte, Katsumi Yoneyama, Hiroki Sasanuma, Sho Tsukamoto, Arei Miyamoto, Naoto Suda, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] Identification of novel BMP-inducible transcript, BIT-1, by utilizing the conserved BMP-responsive elements in the id genes2012

    • Author(s)
      Arei Miyamoto, Masashi Shin, Satoshi Ohte, Hiroki Sasanuma, Katsumi Yoneyama, Shoichiro Kokabu, Sho Tsukamoto, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      第10回RCGMフロンティアシンポジウム
    • Place of Presentation
      埼玉
    • Year and Date
      20121103-20121103
  • [Presentation] Critical Role of ALK2 Phosphorylation at Thr203 in Activation by BMP type II Receptors2012

    • Author(s)
      Satohi Ohte, Mai Fujimoto, Katsumi Yoneyama, Hiroki Sasanuma, Masashi Shin, Sho Tsukamoto, Arei Miyamoto, Toru Fukuda, Shoichiro Kokabu, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      2012 ASBMR Annual Meeting
    • Place of Presentation
      ミネアポリス(アメリカ)
    • Year and Date
      20121012-20121015
  • [Presentation] Identification of a Novel BMP-inducible Transcript, BIT-1, by Utilizing the Conserved BMP-Responsive Elements in the Id Genes2012

    • Author(s)
      Masashi Shin, Satoshi Ohte, Toru Fukuda, Hiroki Sasanuma, Katsumi Yoneyama, Shoichiro Kokabu, Sho Tsukamoto, Hirohoko Hohjoh, Eijiro Jimi, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      2012 ASBMR Annual Meeting
    • Place of Presentation
      ミネアポリス(アメリカ)
    • Year and Date
      20121012-20121015
  • [Presentation] Linker regions of Smad1/5/8 regulate bone-inducing activity of BMPs2012

    • Author(s)
      Sho Tsukamoto, Satoshi Ohte, Katsumi Yoneyama, Mai Fujimoto, Arei Miyamoto, Eiko Murata, Eijiro Jimi, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      2012 ASBMR Annual Meeting
    • Place of Presentation
      ミネアポリス(アメリカ)
    • Year and Date
      20121012-20121015
  • [Presentation] 進行性骨化性線維異形成症から同定された新規 ALK2 変異体の機能解析2012

    • Author(s)
      藤本舞、須田直人、片桐岳信
    • Organizer
      第54回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • Place of Presentation
      福島
    • Year and Date
      20120914-20120916
  • [Presentation] 変異型 Smad1/5/8 を用いた BMP 細胞内シグナルの解析2012

    • Author(s)
      片桐岳信
    • Organizer
      第54回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • Place of Presentation
      福島
    • Year and Date
      20120914-20120916
  • [Presentation] Activation mechanisms of mutant ALK2 found in fibrodysplasia ossificans progressiva by type II BMP receptor2012

    • Author(s)
      Satohi Ohte, Mai Fujimoto, Sho Tsukamoto, Arei Miyamoto, Hiroki Sasanuma, Masashi Shin, Katsumi Yoneyama, Toru Fukuda, Shoichiro Kokabu, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      1st asia-pacific bone and mineral research meeting
    • Place of Presentation
      パース(オーストラリア)
    • Year and Date
      20120902-20120905
  • [Presentation] 進行性骨化性線維異形成症における変異型 BMP 受容体 ALK2 の活性化機構2012

    • Author(s)
      大手聡、藤本舞、米山克美、笹沼寛樹、進正史、塚本翔、宮本阿礼、福田亨、古株彰一郎、片桐岳信
    • Organizer
      第19回BMP研究会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120722-20120722
  • [Presentation] リガンド特異的シグナル伝達をする構成的活性型 Smad の解析2012

    • Author(s)
      塚本翔、大手聡、米山克美、笹沼寛樹、藤本舞、宮本阿礼、片桐岳信
    • Organizer
      第19回BMP研究会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120722-20120722
  • [Presentation] BMP 受容体 ALK2 の Tet-ON 誘導システムによる発現細胞の樹立2012

    • Author(s)
      米山克美、塚本翔、大手聡、笹沼寛樹、進正史、藤本舞、片桐岳信
    • Organizer
      第30回日本骨代謝学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120719-20120721
  • [Presentation] BMP および TGF-b 特異的シグナルを伝達する構成的活性型Smadの解析2012

    • Author(s)
      塚本翔、大手聡、米山克美、藤本舞、進正史、笹沼寛樹、自見英治郎、片桐岳信
    • Organizer
      第30回日本骨代謝学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120719-20120721
  • [Presentation] I 型 BMP 受容体 ALK2 の活性化には II 型 BMP 受容体による GS ドメイン内 Thr203 のリン酸化が必須である2012

    • Author(s)
      大手聡、藤本舞、米山克美、笹沼寛樹、進正史、塚本翔、福田亨、古株彰一郎、片桐岳信
    • Organizer
      第30回日本骨代謝学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120719-20120721
  • [Presentation] Id 遺伝子の BMP 応答領域の解析に基づく新規 BMP 応答性転写産物の同定2012

    • Author(s)
      片桐岳信、進正史、大手聡、福田亨、笹沼寛樹、米山克美、古株彰一郎、宮本阿礼、塚本翔、自見英治郎
    • Organizer
      第30回日本骨代謝学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120719-20120721
  • [Presentation] 成熟骨芽細胞をモニターできる新しい蛍光タンパク質レポーターシステムの開発2012

    • Author(s)
      曽根岳史、進正史、笹沼寛樹、大手聡、片桐岳信、三谷幸之介
    • Organizer
      第30回日本骨代謝学会学術集会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20120719-20120721
  • [Presentation] Molecular Mechanisms of Activation of Mutant ALK2 in FOP2012

    • Author(s)
      Satoshi Ohte, Mai Fujimoto, Sho Tsukamoto, Arei Miyamoto, Hiroki Sasanuma, Masashi Shin, Katsumi Yoneyama, Toru Fukuda, Shoichiro Kokabu, Takenobu Katagiri
    • Organizer
      International conference on bone morphogenetic protein
    • Place of Presentation
      カリフォルニア(アメリカ)
    • Year and Date
      20120619-20120623

URL: 

Published: 2014-07-24  

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